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果蔬中脂氧合酶活性的测定 一、目的要求 了解脂氧合酶的作用，掌握果蔬组织中脂氧合酶活性的测定方法。 二、基本原理 Lipoxygenase LOX 脂氧合酶 （ ， ）是一种含非血红素铁的蛋白质，专一催化 -1,4- 具有顺、顺 戊二烯结构的多元不饱和脂肪酸的加氧反应，生成具有共轭双键 的过氧化物。LOX 在植物中普遍存在，其作用的底物主要为来自细胞质膜的多 测 元不饱和脂肪酸如亚油酸、甲基亚油酸、亚麻酸及花生四烯酸等。LOX 与果蔬 细胞脂质过氧化作用、后熟衰老过程的启动和逆境胁迫、伤诱导、病原侵染信号 检 的产生和识别等关系密切，被认为是引起果蔬后熟衰老的一类重要的酶。 LOX -1,4- 能催化含有顺、顺 戊二烯结构的多不饱和脂肪酸的加合氧分子反 质 应，生成的初期产物具有共轭二烯结构，产物中的共轭双键在波长234nm 处具 有特征吸收。因此，利用分光光度计法可以测定LOX 酶活性大小。 液 三、材料、仪器及试剂 （一）材料 测 芒果、番茄、桃、猕猴桃等。 海 （二）仪器及用具 研钵、高速冷冻离心机、移液器、离心管、紫外分光光度计、容量瓶（100mL、 上 检 1000mL）、试管、计时器。 （三）试剂 质 1．亚油酸钠溶液 方法一：称取亚油酸钠 （Sigma产品），直接配制100mmol/L 亚油酸钠溶液。 方法二：取0.5mL 亚油酸 （化学纯），加入到10mL 蒸馏水中，再加入0.25 液 mLTween-20，摇匀。再逐滴滴加1mol/LNaOH，摇动至溶液变得清亮。然后用 蒸馏水稀释至100mL，即为0.5%亚油酸溶液。 测 海 2．100mmol/L、pH 6.8磷酸钠缓冲液 母液A （200mmol/LNa HPO 溶液）：称取35.61gNa HPO ·2H O 或53.65g 2 4 2 4 2 检 Na HPO ·7H O 或71.64 gNa HPO ·12H O，用蒸馏水溶解，定容至1000mL。 2 4 2 2 4 2 上 母液B （200 mmol/LNaH PO 溶液）：称取27.6 g NaH PO ·H O 或31.2 g 2 4 2 4 2 NaH PO ·2H O 用蒸馏水溶解，定容至1000mL。 2 4 2 质 取49.0mL 母液A 和51.0mL 母液B 混合后，调节pH 至6.8，稀释、定容 至200mL。