食品安全国家标准 食品微生物学检验 诺如病毒检验2023-标准全文及说明.pdfVIP

中华人民共和国国家标准 GB 4789.42— ×××× 食品安全国家标准 食品微生物学检验 诺如病毒检验 （征求意见稿） ××××-××-××发布 ××××-××-××实施 GB 4789.42—xxxx 前 言 本标准代替GB 4789.42-2016 《食品安全国家标准 食品微生物学检验 诺如病毒检验》。 本标准与GB 4789.42-2016相比，主要变化如下： ——修改了标准的适用范围； ——增加了过程控制病毒和诺如病毒G Ⅰ基因组检测用探针； ——修改了“软质水果和生食蔬菜”的前处理步骤和检验结果的判定。 I GB 4789.42—xxxx 食品安全国家标准 食品微生物学检验 诺如病毒检验 1 范围 本标准规定了食品中诺如病毒（Norovirus ）的实时荧光RT-PCR检验方法。 本标准适用于贝类、生食蔬菜、硬质表面食品、软质水果和包装饮用水中诺如病毒的测定。 2 设备和材料 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下： 2.1 实时荧光PCR 仪。 2.2 低温离心机：离心力12 000 ×g ，温度≤4 ℃，套管容积1.5 mL/50 mL。 2.3 无菌刀片或等效均质器。 2.4 涡旋混匀仪。 2.5 电子天平：感量为0.1 g 。 2.6 全温振荡器：温度范围2 ℃~ 60 ℃。 2.7 恒温水浴锅或恒温金属浴：温度范围，室温~100 ℃。 2.8 离心机：离心力5 000 ×g，套管容积50 mL/15 mL。 2.9 高压灭菌器。 2.10 低温冰箱：-80 ℃。 2.11 微量移液器。 2.12 pH 计或精密pH 试纸。 2.13 无菌均质袋：带滤网，容积400 mL 。 2.14 无菌棉拭子。 2.15 无菌贝类剥刀。 2.16 橡胶垫。 2.17 无菌剪刀。 2.18 无菌镊子。 2.19 无菌培养皿。 2 GB 4789.42—xxxx 2.20 无RNase 玻璃容器、无RNase 离心管、无RNase 移液器吸头、无RNase 药匙、无RNase PCR 薄 壁管：见附录E.1.2 。 2.21 正压泵。 2.22 超滤浓缩离心管（截留分子量 100 kD）。 2.23 无菌混合纤维素膜（孔径0.45 μm ，直径47 mm ）。 3 培养基和试剂 除有特殊说明外，所有实验用试剂均为分析纯；实验用水均为无RNase 超纯水（见附录E.2.1 ）。 3.1 G Ⅰ和G Ⅱ基因型诺如病毒引物和探针：见附录A。 3.2 过程控制病毒引物和探针：见附录C。 3.3 过程控制病毒：门哥病毒或大肠埃希氏菌噬菌体MS2 ，见附录C。 3.4 外加扩增控制RNA：见附录D 。 3.5 Tris/甘氨酸/牛肉膏（TGBE）缓冲液：见附录E.2.2 。 3.6 5×PEG/NaCl 溶液：见附录E.2.3 。 3.7 磷酸盐缓冲液 （PBS ）：见附录E.2.4 。 3.8 氯仿/正丁醇混合液：见附录E.2.5 。 3.9 蛋白酶K 溶液：活性30 U/mg，见附录E.2.6 。 3.10 75 % 乙醇：见附录E.2.7 。 3.11 Trizol 试剂：见附录E.2.8 。