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磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶活性的测定 磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶 （PEPC）存在于细菌、藻类和高等植物中，催化PEP 的不可逆羧化反 应，形成草酰乙酸。在细菌中，PEPC对三羧酸循环的运转起重要的调节作用，在C 植物叶片 4 中它固定CO 而参与光合C 循环，是光合C 途径的关键酶。 2 4 4 1 仪器设备 紫外分光光度计、组织捣碎机、低温高速离心机等。 2 操作方法 1）酶的提取 在4℃条件下进行。叶片洗净、擦干，按1：4 （w/v）比例加提取缓冲液 （含100mmol/LTris-HSO pH8.2，7mmol/L 巯基乙醇，1mmol/L EDTA，5%甘油），捣碎，4 层纱布去粗，滤液以3000×g 离心20min，上清液以硫酸铵分部沉淀，收集30%～50%饱和度的硫酸铵的沉淀物，再悬浮于小 体积的提取缓冲液中 （如材料中PEPC含量较高，可省略分部沉淀一步）。 2）酶的活力测定 利用偶联酶方法，检测340 处NADH 光吸收值的变化。 反应总体积1ml，含100mmol/L Tris-HCL，pH7.5；5mmol/LMgCl ，1mmol/LP