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碳青霉烯类抗生素耐药机制及药物治疗研究进展 碳青霉烯类抗生素属于i-内酰胺类抗生素。具有广泛的抗菌谱和内酰胺酶，以及较强的抗菌活性和低毒性。作为对抗细菌的“最后一道防线”之一，它在对医院重症感染的治疗中发挥了重要作用。 β-内酰胺酶根据氨基酸同源性分为A、B、C和D类 (Ambler分类法) 。其中A、C和D类酶活性位点含有丝氨酸残基, 可以称作丝氨酸碳青霉烯酶;B类酶需要Zn 1 获得性b类碳青霉烯酶 金属碳青霉烯酶根据氨基酸序列同源性以及对金属离子的需求, 分为B1、B2、B3和B4 4个亚族, 另外, Bush等 B类金属酶最常见的有VIM酶 (Verona整合子编码的金属酶) 、IMP酶 (耐亚胺培南假单胞菌产金属酶) 和NDM酶 (新德里金属β-内酰胺酶) , 这3个家族的酶是最常见的获得性B类碳青霉烯酶。IMP组包括48种分型, 分离自临床重要的革兰阴性菌, 如肠杆菌科, 假单胞菌属和不动杆菌属;VIM组包括41种分型, 主要分离自肠杆菌科, 部分来自铜绿假单胞菌 2 金属碳青霉烯酶系统 金属碳青霉烯酶的序列相似性虽然仅有25%, 但是它们的三维结构相似, 由2个位于中间的β-片层和5个位于表面的α-螺旋构成了以αβ/βα的“三明治”结构为特点的构象。Zn B1和B3类金属碳青霉烯酶包括2个Zn B 2碳青霉烯酶只与Zn2结合发挥活性, 与Zn1的结合反而使活性下降。B2中Zn2和Asp120、Cys221、His263及1个水分子结合, 由Asp120或者His118激活, 而不是Zn2激活水分子, 亲核进攻羰基碳原子。接着氮原子由His118、Asp120残基和1个水分子或者与Zn2结合的1个水分子来实现质子化作用, 接着内酰胺环被破坏, 酶将之释放, 恢复活力 SPR-1作为B4类, 也包括2个Zn 3 金属酶抑制剂的作用机制 根据耐药机制设计相应的碳青霉烯酶抑制剂是解决耐药的有效方法, 临床上应用的丝氨酸抑制剂均难以抑制金属碳青霉烯酶的活性。尽管有报道称金属螯合剂、二氮菲和吡啶二羧酸对所有金属β-内酰胺酶 (metallo-β-lactamases, MBLs) 有抑制作用, 然而它们在临床上却没有很大意义。因为临床有效的金属酶抑制剂须符合以下条件: (1) 对人体金属酶无害, 如血管紧张素转化酶 (angiotensin converting enzyme, ACE) ; (2) 对各种MBLs或同种类型MBLs起作用。金属碳青霉烯酶是造成多重耐药局面的重要原因, 以下重点介绍目前发现的金属碳青霉烯酶抑制剂的结构, 主要将其分为两类:一类是含有β-内酰胺环结构, 另一类是锌离子配合物, 或是锌离子螯合物。 3.1 含有-内酰胺环结构的金属酶抑制剂 含有β-内酰胺环结构的金属酶抑制剂可能容易进入酶活位点, 从而使酶失活;也可能螯合了辅基, 使酶失去催化能力。 3.1.1 氨基乙酸钠和氨基酸丙烯酸酯mls的抑制剂 8-硫代头孢菌素的水解产物 (图3化合物1) 是BcⅡ酶的底物, 抑制常数Ki=96μmol/L 3.1.2 类和青霉烷类的mblc抑制剂 改变青霉素类抗生素的结构, 使其与金属酶结合抑制MBLs的活性从而提高药物抗菌活性 3.1.3 碳青霉烯类衍生物 6位取代的亚乙基青霉烯对Ccr A酶的抑制活性在14~260nmol/L, 其中化合物6 (图5) 的活性最好, IC C-2位含有二硫代氨基甲酸、苯并噻吩巯基及吡咯烷基硫亚胺的1β-甲基碳青霉烯类衍生物具有良好的抑酶活性。其中, 化合物7 (J-110, 441) (图5) 可作为MBLs (如Bc II酶、L1酶、Ccr A酶和IMP-1酶) 的广谱抑制剂, 它存在和酶相互作用后能产生与锌螯合的基团而抑制酶的活性 3.2 不含-内酰胺环结构的抑制剂 3.2.1 氨基酸及氨基酸类mbls抑制剂 氨基酸及类氨基酸中含有可能与金属离子螯合的结构, 如果氨基酸能作为MBLs的抑制剂, 则具有低毒性的可能, 基于此构想设计氨基酸类了抑制剂 N-苯甲酰-D-半胱氨酸9 (图6) 是Bc II酶的潜在抑制剂 (Ki=740nmol/L) 3.2.2 竞争抑制剂的筛选 含巯基的化合物对Zn 经典的MBLs抑制剂-硫醇:巯基乙酸13 (图7) (IC 合成的巯基磷酸类化合物, 大多数可作为MBLs中B1、B2和B3 3个亚型的竞争抑制剂。除个别化合物外, 绝大多数巯基磷酸类化合物对Cph A酶 (B2亚型MBLs) 具有良好的抑制活性 (Ki15μmol/L) , 其中代表物17 (图7) 最具开发前景 此外, 含有疏水基团的巯基羧酸化合物18 (P h e n y l C 硫酯类化合物其抗MBLs (BcⅡ、Cfi A、L1和Cph A) 活性不尽同 (IC