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新型大豆苷元苯磺酸酯衍生物的构关系研究 大豆（da1）是大豆的二次代谢产物。根据近年来的研究，da1具有重要的生理功能，如抗动脉硬化、预防癌症、预防心血管疾病、降血糖、阻力、抗衰老等。 由于传统加热法在衍生物大豆苷元-7-苯磺酸酯（D2）上引入烷基十分困难，为提高目标衍生物的产率，采用微波加热法合成大豆苷元-4′-甲氧基-7-苯磺酸酯（D3）和大豆苷元-4′-乙氧基-7-苯磺酸酯（D4），并D3和D4进行药学性质研究。利用HPLC测试药物的溶解度和表观脂水分配系数（lgP），以及利用药物设计软件ChemAxon16.1.18对DA1及衍生物的lgP、分子极性表面积、分子可极化率、分子摩尔折射率、氢键和解离常数（pK 1 材料、试剂和培养基 WRR型数字显示显微熔点仪（北京泰克仪器有限公司），温度计未经校正。THZ-22台式恒温振荡器（江苏太仓实验仪器设备厂），XH-MC-1型祥鹄实验室微波合成反应仪。药物计算软件ChemAxon16.1.18。Agilent 1260 HPLC[Agilent 1260自动进样器（G7129A) , EC-C DA1纯度98%，购于陕西慧科植物开发有限公司；青霉素链霉素混合液购自Solarbio，生物级二甲基亚砜（DMSO）购自Sigma；南美胎牛血清（No:11G327）购自Excell, DMEM高糖培养基（No:A购自Hyclone。HVSMCs购自北纳创联生物技术有限公司。其余试剂为化学纯或分析纯。 2 大豆苷元苯磺酸酯的微波合成 D2、D3、D4的常规方法合成由本实验室完成 2.1 硫酸二甲酯3-甲基苯磺酸酯制备 66℃时，于100 mL烧瓶中加入D2 0.358 6 g，丙酮20 mL，再加入碳酸钾0.629 5 g溶于反应液，在剧烈搅拌下加入硫酸二甲酯1.24 mL，微波功率300 W，回流反应55 min，薄层层析（TLC）检测反应完成后，抽滤得初产品，柱层析纯化流动相为二氯甲烷-丙酮（20∶1），得白色固体0.2674 g，产率72%。 2.2 微波合成丙酮 58℃时，于100 mL烧瓶中加入D2 0.729 8 g，丙酮32 mL，再加入由氢氧化钾0.216 8 g溶于0.8 mL水配成的溶液，10 min内在剧烈搅拌下滴加硫酸二乙酯0.9 mL的丙酮18 mL溶液，微波功率200 W，回流反应30 min, TLC检测反应完成后，将反应物置于冰水中，用乙酸乙酯萃取（25 mL×3），用无水硫酸钠干燥过夜，柱层析纯化流动相为二氯甲烷-丙酮（20∶1），得白色固体0.671 5 g，产率86%。 3 gp生物活性预测 分别用HPLC测定D3、D4的溶解度和lgP，通过软件ChemAxon16.1.18对其分子极性表面积、分子可极化率等进行计算，预测其在机体内的转运过程及生物活性。 3.1 条件1 流动相：乙腈-甲醇（1∶1）；流速：1.0 mL·min 3.2 标准溶液的制备 精密称取D3适量，用甲醇溶解，配成质量浓度为230μg·mL 3.3 检测方法的配置 3.3.1 色谱条件的测定 取“3.2”项下D3、D4质量浓度的系列标准溶液，采用“3.1”项下色谱条件进行测定。以待测物质量浓度X为横坐标，峰面积Y为纵坐标，用加权最小二乘法进行回归运算，得D3、D4的回归方程： 线性范围分别为0.46～18.4μg·mL 3.3.2 定量上限loq和检测下限lod 按照“3.2”项下方法制备含D3质量浓度为230 ng·m L 3.3.3 测定qc样品的rsd与re 制备D3和D4的低、中、高3个浓度的质量控制（QC）样品，每一浓度进行六样本分析，连续测定3 d，计算QC样品的浓度，与配制浓度对照，求算各成分测定方法的RSD与RE，结果见表2。实验结果表明，D3、D4的日内精密度均在12%以内，日间精密度小于13%，准确度在-6.6%～13%，均在合理范围之内。 3.4 表观脂水分布系数的测定 3.4.1 d和d4的lgp 脂水分配系数测定结果见表3。在所有测定溶剂中，D3、D4的溶解度相对于DA1而言，有极大提高。在环己烷中，D3溶解度达到124.4μg·mL 根据实验测定衍生物在水相的浓度ρ 由式（1）求出D3、D4的lgP。从表3可以看出，D3、D4的lgP分别为2.73和2.19。D3、D4的lgP均在2.0～3.0之间，处在对中枢神经系统和非中枢神经系统的口服活性药物最佳范围，预示该药代谢倾向较低和有良好的中枢神经系统渗透作用 4 药物：人动脉血管平滑肌细胞的吸收 4.1 细胞培养和药物处理 取HAVSMCs冻存管复苏，取传代3～10代的HAVSMCs于10 4.2 细胞内降清液制备 取-80℃冷冻的空白细胞上清液，常温解冻，涡旋1 min，取细胞上