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蝉花孢梗束的毒理学评价 蝉花是甘草科的一种真菌性甲壳类动物。它是一个传统的贵中药。《本草纲目》记载了它的甜、寒、毒，可入肺和肝经络。散风热、目镜、消去阴影、皮疹等症状。主要治疗孩子的天鹅、心悸、夜间哭泣等疾病。现代研究表明蝉花具有明目护眼 1 材料表面 1.1 细胞、细胞生学和s9 蝉花孢梗束，采用蝉花菌Isaria cicadae Miquel经小麦等粮食培养基固态发酵培养而得的孢梗束（ICS），菌种由浙江泛亚生物医药股份有限公司提供，经中国科学院微生物研究所郭英兰教授鉴定为蝉花I.cicadae Miquel。 中国仓鼠肺（CHL）细胞株购自上海细胞库；丝裂霉素C，浙江海正药业有限公司产品，批号101203；环磷酰胺，江苏恒瑞医药股份有限公司产品，批大鼠肝脏肝微粒体酶（S9),Xeno Tech.LLC公司产品，批号1010120；叠氮钠（NaN 1.2 菌株和菌株的选择 鼠伤寒沙门氏菌菌株TA97a、批号4584D，菌株TA98、批号4599D，菌株TA100、批号4600D，菌株TA102、批号4604D，菌株TA1535、批号4602D，均购自于Moltox,Molecular Toxicology,INC.公司。 1.3 -4001 SPF级SD大鼠24只，体质量160～180 g，雌雄各半，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，动物生产许可证号：SCXK（京）2012-0001；实验动物质量合格证号11400700194208;SPF级Wistar大鼠150只由湖北省实验动物研究中心提供，实验动物生产许可证号SCXK（鄂）2008-0005，实验动物使用许可证号：SYXK（鄂）2012-0065。 ICR小鼠35只，购自上海西普尔必凯实验动物有限责任公司。动物合格证号：2008001622313，生产许可证号码SCXK（沪）：SCXK（沪）2008-0016。 2 方法 2.1 单次给药后大鼠的临床症状 本研究共使用20只SD大鼠，雌雄各半，检疫7 d，进行体质量测定和临床症状观察。检疫期结束后，随机分为2组，各10只、雌雄各半，分别为溶媒对照组、蝉花组（给予12 g/kg），给药体积均为20 mL/kg。首次给药后连续观察动物的姿势、步态、反应状态、神经活动、食欲、被毛、眼睛、耳、口、鼻、四肢、呼吸、粪便等临床症状，最长至给药后6 h。随后继续观察14 d，观察动物的临床症状、活动等。第15 d对全部动物进行大体病理学检查。 2.2 细胞培养和给药 选择CHL细胞作为试验细胞株，同时设加代谢活化系统（+S9）和不加代谢活化系统（-S9）组。根据预实验结果，确定蝉花孢梗束剂量（终浓度）为0.058、0.029、0.0145 mg/mL，同时设溶剂对照组（去离子水）和阳性对照组（-S9用丝裂霉素C 0.000 5mg/mL,+S9用环磷酰胺0.04 mg/mL），每组设2瓶细胞作为平行对照。给药后分别在24、48 h收集细胞并制片。每组观察200个细胞中期分裂相内的染色体畸变数，计算染色体畸变率。 2.3 动物的给药和给药方案 ICR小鼠按体质量通过简单随机化方式分为5组，每组10只，雌雄各半。给药前禁食不禁水过夜，受试物分别按1.5、3、6 g/kg剂量对所有给药组动物进行给药。第1组作为对照组接受空白溶剂（去离子水）。第5组作为阳性对照组接受剂量为0.04 g/kg的环磷酰胺。受试物或溶剂按20 mL/kg的给药体积单次给动物ig，环磷酰胺按10 mL/kg的给药体积给动物单次ip。对所有动物每天进行2次笼边观察，以确定其是否有发病，死亡，损害等状况出现，以及供食和供水是否充足。实验期间所有动物给药当天在给药后30 min和给药后4 h时进行1次详细观察，实验期间每天上下午各进行1次详细观察；动物在给药当天称体质量并记录；按实验计划对所有存活的动物在给药24 h后实施安乐死并解剖，取两侧股骨骨髓进行骨髓涂片，经固定、染色和封片后进行阅片检查。观察每只动物骨髓中嗜多染红细胞（PCE）/正染红细胞（NCE）的比值。每只动物至少计数2 000个PCE细胞。 2.4 菌株回复突变试验 选择鼠伤寒沙门氏菌TA97a、TA98、TA100、TA102、TA1535作为试验菌株，并设置药物剂量组：320、160、80、40、20μg/皿，每个剂量组设3个平皿作为平行对照。每个菌株均设加代谢活化系统（+S9）和不加代谢活化系统（-S9）两组。另外设溶剂对照组（去离子水）、空白对照组（去离子水）和阳性对照组。给药1次，给药后菌株培养72 h后记录各组菌株的回变数，并进行重复试验，以确定试药的致突变性。 阳性对照药及剂量：+S9系统中，TA97a、TA98、TA100组阳性对照为20μg/皿2-氨基芴，TA1