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刺梨原汁酒中总黄酮的测定 原黑莓果汁是以蓝莓果实为主要原料通过发酵和提取而成的原果汁。酒中含有丰富的黄酮类化合物，可以预防神经系统、免疫系统、皮肤、骨骼和生殖系统的衰老。目前，测定黄酮类化合物的方法有紫外-可见分光光度法、高效液相色谱法。但测定刺梨原汁酒的总黄酮方法未见报道，本文采用芦丁作为标准物质，用硝酸铝-亚硝酸钠体系显色，紫外-可见分光光度法测定刺梨原汁酒的总黄酮。 1 材料和方法 1.1 实验室用水及仪器 (1）材料。刺梨原汁酒6批；芦丁对照品（批号：100080-200707），含量92.5%）由中国食品药品检定研究院提供；实验室用水为二级纯化水；其它试剂均为分析纯。 (2）仪器。紫外分光光度计（型号：TU-1901，北京普析）；万分之一电子天平（型号：AUY220，赛多利斯）；十万分之一电子天平（型号：AUW220D，赛多利斯）；TAISITE数显电热恒温水浴锅；双频数控超声波清洗器（型号：KQ-300VDE，昆山市超声仪器有限公司）。 1.2 实验方法 1.2.1 黄酮，原果汁 精密吸取刺梨原汁酒10 mL至100 mL容量瓶中，加水定容至刻度，摇匀，即得待测样品。 1.2.2 对照溶液的制备 精密称取26.10 mg的芦丁对照品溶液置于100 mL容量瓶中，用无水乙醇溶解并定容至刻度线，摇匀，即得0.241 4 mg·mL 1.2.3 显色剂的制备 准确称取九水合硝酸铝于烧杯中，加水配制成10%的溶液待用。另外配制5%亚硝酸钠和10%的氢氧化钠溶液于试剂瓶中，待用。 1.2.4 标准曲线的绘制 分别精密量取0.241 4 mg·mL 1.2.5 亚硝酸钠空白溶液 精密吸取样品溶液1.0 mL于25 mL容量瓶中，别取1.0 mL无水乙醇溶液作为空白溶液，分别加5%亚硝酸钠溶液1.0 mL,混匀，放置6 min，加10%硝酸铝溶液1.0 mL，混匀，放置6 min，加10%氢氧化钠溶液，摇匀后用乙醇补齐至刻度，再摇匀，显色30 min。在最大吸收波长处测定以无水乙醇管作为空白测定吸收度。 2 结果与分析 2.1 紫外分光光度计扫描 芦丁标准溶液经硝酸铝-亚硝酸钠显色后用TU-1901型紫外可见分光光度计在400～600 nm范围扫描。扫描结果表明，标准溶液均在503 nm处有最大吸收，确定该波长为测定波长。 2.2 标准曲线的绘制 以芦丁标准溶液浓度为横坐标，吸收度为纵坐标绘制标准曲线，并得出回归方程y=12.574x+0.009 41,R 2.3 l容量瓶精密度试验 吸取样品溶液1.0 mL于25 mL容量瓶中，按硝酸铝-亚硝酸钠法显色，测试6次，相对标准偏差RSD=1.55%，结果表明精密度良好，见表1。 2.4 供试品溶液稳定性 精密吸取样品溶液1 mL于25 mL容量瓶中，按硝酸铝-亚硝酸钠法显色，每隔10 min测定一次吸收度，连续1 h考察其稳定性，计算RSD为0.80%，结果表明，供试品溶液在1 h内稳定，见表2。 2.5 重复性试验结果 精密称取同一批样品6份，精密吸取10 mL，置100 mL容量瓶中，按硝酸铝-亚硝酸钠法显色，分别测定其吸收度，计算RSD值（n=6）为1.03%，表明该方法重复性好，见表3。 2.6 加入2.0.3ml容量瓶 取同一批样品6份见表4，每份5 mL于100 mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，再精密量取1.0 mL于25 mL容量瓶中，其中3份加入3 mL 0.241 4 mg·mL 2.7 总黄酮吸收度的测定 精确称取6批刺梨原汁酒样品，各10 mL，按照1.2.1的方法制备总黄酮，精密吸取样品溶液1.0 mL置25 mL容量瓶中，按硝酸铝-亚硝酸钠法显色制备后，分别测定其吸收度，根据回归方程，计算结果见表5。 3 总黄酮含量的测定 本文以芦丁为对照品，硝酸铝-亚硝酸钠法显色法测定刺梨原汁酒中的总黄酮含量，其实验原理是在待测溶液中加入硝酸铝-亚硝酸钠-氢氧化钠溶液，铝离子与黄酮类化合物3,4-二羟基发生络合反应使溶液呈红色，试样溶液颜色的深浅由样品中总黄酮含量决定。结果表明，刺梨原汁酒中保留了刺梨果中的大量黄酮类物质，据报道植物中黄酮类物质能延缓神经系统、免疫系统、皮肤、骨组织和生殖系统的衰老的作用，刺梨原汁酒是由刺梨果开发而得的果酒，能保持刺梨果酒原有的营养成分，具有开发价值。