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木蝴蝶药材的质量控制研究 木槿花是紫穗科植物木槿花（l.）的干燥、成熟种子。性寒，苦，甜，属于肺、肝、胃。其功能是润肺、疏肝、和胃的肌肉，用于治疗肺热咳嗽、声音嘶哑和上腹部疼痛。木蝴蝶的成分主要有白杨素、木蝴蝶苷A、木蝴蝶苷B、特土苷等。现代药理研究表明, 其具有抗菌、抗炎、抗癌等作用。木蝴蝶为2010年版《中国药典》收载品种, 但其质量标准中只有性状、水分、鉴别和浸出物检查等控制项目;文献报道以黄芩苷含量为指标对其质量进行过评价。鉴于此, 本研究拟增加总灰分、酸不溶性灰分和杂质的检测项目, 并测定不同地区市售木蝴蝶药材中木蝴蝶苷B的含量, 为进一步完善木蝴蝶药材的质量评价提供依据。 1 材料表面 1.1 热电恒温干燥箱 LC200型高效液相色谱 (HPLC) 仪 (上海精密科学仪器有限公司) ;DHG-9140A/JY-010型电热恒温干燥箱 (上海鸿都电子科技有限公司) ;KQ3200VDB型双频数控超声波清洗器 (昆山市超声仪器有限公司) ;FA2004B/JY-001型电子天平 (上海越平科学仪器有限公司) ;FW315型中草药粉碎机 (天津泰斯特仪器有限公司) ;SX2-4-10型箱式电阻炉 (深圳市中达电炉厂) 。 1.2 检试单位 木蝴蝶苷B对照品 (中国食品药品检定研究院, 批号:111915-201001) ;甲醇为色谱纯, 水为超纯水, 其他试剂均为分析纯。 1.3 样品及药品鉴定 于2013年5月从广东、广西、云南、海南等地购回木蝴蝶药材共4批样品, 编号1~4, 经广东省新兴中药学校彭瑞松副主任中药师鉴定为紫葳科植物木蝴蝶O.indicum (L.) Vent.的干燥成熟种子。 2 方法和结果 2.1 总灰分与酸不溶性灰 取4批木蝴蝶药材各适量, 粉碎成细粉, 过二号筛, 分别按2010年版《中国药典》 (一部) 附录方法测定总灰分与酸不溶性灰分, 结果见表1。 2.2 木材材料的杂质测试 取4批木蝴蝶药材各适量, 分别按2010年版《中国药典》 (一部) 附录方法进行杂质检查, 结果见表1。 2.3 木蝴蝶b含量测定 2.3.1 流动相、柱温度,a 色谱柱:Promosil C18(200 mm×4.6 mm, 5μm) ;流动相:甲醇-水-磷酸 (42∶58∶0.2, V/V/V) ;流速:1.0 ml/min;柱温:25℃;检测波长:254 nm;进样量:10μl。色谱见图1。 2.3.2 制备工艺的制备 取本品粉末 (过二号筛) 约0.5 g, 精密称定, 置具塞锥形瓶中, 精密加入甲醇50 ml, 称定质量, 加热回流1 h, 放冷, 再称定质量, 用甲醇补足减失的质量, 摇匀, 滤过, 取续滤液, 即得。 2.3.3 木必木b的制备 精密称取木蝴蝶苷B对照品适量, 置100 ml量瓶中, 加50%甲醇溶解并稀释至刻度, 摇匀, 制成每1 ml含木蝴蝶苷B 0.01 mg的溶液, 即得。 2.3.4 对照品进样量的测定 精密称取木蝴蝶苷B对照品10.17 mg, 置10 ml量瓶中, 加50%甲醇溶解并稀释至刻度, 摇匀;精密量取该溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 ml, 分别置2 ml量瓶中, 加50%甲醇稀释至刻度, 摇匀, 按上述色谱条件分别进样10μl, 测定峰面积。以峰面积积分值 (x) 对对照品进样量 (y) 进行线性回归, 得回归方程为y=0.000 05x+0.037 5 (r=0.999 9, n=5) 。结果表明, 木蝴蝶苷B的进样量在1.017~5.085μg范围内与峰面积积分值呈良好线性关系。 2.3.5 进样测定次数 取对照品溶液适量, 按上述色谱条件进样测定, 重复6次, 记录峰面积。结果显示, RSD=0.03% (n=6) , 表明仪器精密度良好。 2.3.6 溶液制备与测定 取本品粉末 (样品号:1) 适量, 共6份, 分别按“2.3.2”项下方法制备供试品溶液, 再按上述色谱条件进样测定, 记录峰面积。结果显示, 样品中木蝴蝶苷B的平均质量分数为5.32%, RSD=2.23% (n=6) , 表明本方法重复性良好。 2.3.7 进样及进样面积 取同一供试品溶液 (样品号:1) 适量, 分别于0、2、4、8、12、24、48、72 h按上述色谱条件进样测定, 记录峰面积。结果显示, RSD=0.43% (n=8) , 表明供试品溶液在72 h内稳定性良好。 2.3.8 加样回收率试验 取已测知含量的同一批木蝴蝶粉末 (样品号:1) 约0.1 g, 精密称定, 分别精密加入10 ml木蝴蝶苷B对照品溶液 (0.543 mg/ml) , 按“2.3.2”项下方法制备供试品溶液, 再按上述色谱条件进样测定, 计算加样回收率, 结果见表2。 2.3.9