水质 总大肠菌群和粪大肠菌群的测定 纸片快速法(HJ 755-2015).pdfVIP

目 次 前 言ii 1 适用范围1 2 术语与定义1 3 方法原理1 4 试剂和材料1 5 仪器和设备2 样品2 7 分析步骤3 8 结果计算与表示5 9 精密度和准确度5 10 质量保证和质量控制 11 废物处理 附录A （资料性附录）结果判定参考图片7 附录B （资料性附录）最大可能数（MPN）表8 前 言 为贯彻 《中华人民共和国环境保护法》和 《中华人民共和国水污染防治法》，保护环境， 保障人体健康，规范水中总大肠菌群和粪大肠菌群的测定方法，制定本标准。 本标准规定了地表水和废水中总大肠菌群和粪大肠菌群测定的纸片快速法。 本标准为首次发布。 本标准附录A和附录B为资料性附录。 本标准由环境保护部科技标准司组织制订。 本标准主要起草单位：常州市环境监测中心、环境保护部环境标准研究所。 本标准验证单位：上海市环境监测中心、江苏省环境监测中心、浙江省环境监测中心、 苏州市环境监测中心站、南京市环境监测中心站和泰州市环境监测中心站。 本标准环境保护部2015年 10月22 日批准。 本标准自2015年 12月1 日起实施。 本标准由环境保护部解释。 ii 水质 总大肠菌群和粪大肠菌群的测定 纸片快速法 1 适用范围 本标准规定了测定水中总大肠菌群和粪大肠菌群的纸片快速法。 本标准适用于地表水、废水中总大肠菌群和粪大肠菌群的快速测定。 本方法的检出限为20MPN/L。 2 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 2.1 总大肠菌群 total coliforms 37℃培养，24h 内能发酵乳糖产酸产气的需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。 2.2 粪大肠菌群 fecal coliforms 44.5℃培养，24h 内能发酵乳糖产酸产气的需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。 2.3 最大可能数 most probable number，MPN 微生物检验常用发酵法，又称稀释法，是一种利用统计学原理定量检测微生物浓度的方法。它根据不 同稀释度一定体积样品中被检微生物存在与否的频率，查表求得样品中微生物的浓度，与直接报告菌落数 的平板计数法不同，它最终报告的是样品中最有可能存在的目标微生物浓度，这个以最大可能存在的浓度， 就被称为最大可能数（mostprobablenumber，缩写为MPN)。 3 方法原理 按MPN法，将一定量的水样以无菌操作的方式接种到吸附有适量指示剂 （溴甲酚紫和2，3，5-氯化三 苯基四氮唑即TTC）以及乳糖等营养成分的无菌滤纸上，在特定的温度 （37℃或44.5 ℃）培养24h，当细 菌生长繁殖时，产酸使pH值降低，溴甲酚紫指示剂由紫色变黄色，同时，产气过程相应的脱氢酶在适宜的 pH范围内，催化底物脱氢还原TTC形成红色的不溶性三苯甲臜 （TTF），即可在产酸后的黄色背景下显示 出红色斑点（或红晕）。通过上述指示剂的颜色变化就可对是否产酸产气作出判断，从而确定是否有总大 肠菌群或粪大肠菌群存在，再通过查MPN表就可得出相应总大肠菌群或粪大肠菌群的浓度值。 4 试剂和材料 除非另有说明，分析时均使用符合国家标准的分析纯化学试剂。 4.1 市售水质总大肠菌群和粪大肠菌群测试纸片：10ml水样量纸片、1ml水样量纸片 按以下方法进行质量鉴定，达到要求后方可使用。 （1）外层铝箔包装袋应密封完好，内包装聚丙烯塑膜袋无破损。 （2）纸片外观应整洁无毛边，无损坏，呈均匀淡黄绿色，加去离子水或蒸馏水后呈紫色，无论加水与 1 否，应无杂色斑点，无明显变形，表面平整。 纸片不加水 纸片加水 （3）纸片加入相应水样，充分浸润、吸收后，将内包装聚丙烯塑膜袋倒置，袋口应无水滴悬挂。 （4）纸片以去离子水或蒸馏水充分润湿后，其pH值应在7.0～7.4范围内。 （5）纸片和内包装聚丙烯塑膜袋应无菌，加入相应水量的无菌水，37℃±1℃培养