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碳酸氢铵对小鼠的ld50及可信性研究 碳酸氢铵（俗称臭粉）是食品行业中应用广泛的缓解剂。配方为ch5no3。碳酸氢铵在食品加工过程中, 产生出氨和二氧化碳, 可以使食物变得膨松。由于限制明矾的使用, 所以在食品中常用碳酸氢铵来替代, 实际使用时与碳酸氢钠合用, 可作面包、饼干、煎饼等膨松剂的原料, 亦用作发泡粉末果汁的原料;还可用于绿色蔬菜、竹笋等烫漂, 以及医药及试剂;发酵粉亦以本品为主要成分, 配以酸性物质;碳酸氢铵也可作为肥料。经研究它会对皮肤、眼和呼吸系统造成刺激。此外, 在油炸和烘烤过程中形成的丙烯酰胺, 经大量的试验动物研究证明它属于中等毒性物质, 主要引起神经毒性, 现没有证据证明人体在丙烯酰胺暴露量下与癌症发生率有直接关系。为了日常生活中安全使用碳酸氢铵, 本试验进行急性毒性试验研究。 1 材料和方法 1.1 材料表面 碳酸氢铵:天津市天力化学试剂有限公司, 分析纯。 试验动物:昆明种小鼠, 体重20~25 g。 1.2 方法 1.2.1 动物死亡情况观察 找出0 (Dn) 和100% (Dm) 估计致死剂量。取20只小鼠, 按性别分类后, 根据体重随机分为5组。禁食24 h。配制系列浓度的碳酸氢铵, 以各浓度的0.02 m L·10g-1给每只小鼠一次性腹腔注射, 连续观察7 d, 记录动物的死亡情况。根据观察结果, 当出现4/4死亡时, 如其前一组为3/4死亡, 则取4/4组的剂量为Dm, 如前一组为2/4或1/4死亡, 考虑到4/4组的剂量在正式实验中可能的死亡率低于70%, 为慎重起见, 可将4/4组的剂量乘以2作为Dm;当出现0/4死亡时, 如其后一组的死亡率为1/4, 则取0/4组的剂量为Dn, 如后一组死亡率大于1/4, 考虑到0/4组的剂量在正式实验中可能的死亡率高于70%, 则将0/4组的剂量除以2, 作为Dn。采用此方法, 确定碳酸氢铵的Dm、Dn分别为495mg·kg-1和369 mg·kg-1。 1.2.2 试验1,碳酸氢铵剂量试验 取体重20~25 g左右的小鼠40只, 按体重随机分成4组, 每组10只, 雌雄各半。剂量比值根据公式设为0.907, 碳酸氢铵各组剂量分别为495 mg·kg-1、449 mg·kg-1、407 mg·kg-1和369 mg·kg-1。试验前禁食24 h, 正常给水。按0.2 m L·10g-1腹腔注射一次性给药。 1.3 观察指标 给药后, 连续观察7 d, 详细记录不同浓度梯度下小鼠每天的死亡数和时间, 及出现的异常现象。 1.4 ld50的标准误用、可信限及测量方法 统计各组小鼠死亡数, 计算死亡率 (p) , 按孙氏改良寇氏公式[7~9], 计算LD50值;lg LD50的标准误按 (2) 式计算;LD50的95%可信限按 (3) 式计算。 其中:Xm为最大剂量的对数;i为相邻两组高剂量与低剂量之比的对数;p为各组死亡率 (以小数表示) ;Σp为各组动物死亡率的总和。 2 结果与分析 2.1 小鼠死亡数及死亡时间对小鼠的影响 给药后, 小鼠暂时出现不进食, 呼吸困难, 烦躁不安等症状, 小鼠死亡前剧烈抽搐、浑身发抖、在鼠笼中乱撞, 直到死去, 死后眼睛、尾巴均发黑, 且尸体僵硬。存活小鼠10 min后开始进食, 以后均未出现行为异常。各组小鼠死亡数和死亡时间见表1, 从表1可看出, 给药后小鼠在3 d内死亡, 后4 d小鼠未见死亡。雄性小鼠的死亡数多于雌性小鼠。 2.2 可信限 碳酸氢铵半数致死量试验原始数据和计算资料见表2, 按照表内数据和计算公式 (1) 、 (2) 和 (3) 得出: Sm=0.00648, X50=2.6671 LD50的95%可信限为:452.2~478.40 mg·kg-1。 3 碳酸氢铵的安全性 LD50值是以动物死活的质反应为指标的毒性数据, 此数值可作为衡量药物毒性或效应大小的常用指标。半数致死量与毒性成反比, 致死量越大毒性越小, 致死量越小毒性越大。已知碳酸氢铵对小鼠静脉注射的LD50值为245 mg·kg-1, 我们测得LD50小鼠经腹腔注射的为463.6mg·kg-1, 因此碳酸氢铵具有毒性。碳酸氢铵分解全部是气体, 无残渣, 没潜在的污染性, 实际碳酸氢铵的日常用量为100 mg·kg-1, 远低于前两个值, 所以日常使用安全性较大。 lg LD50的标准误: 其中:n为每组动物数;q=1-p。 碳酸氢铵的LD50=463.6 mg·kg-1,