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猪链球菌灭活疫苗猪链球菌2型+马链球菌兽疫亚种免疫效果检验 猪链霉菌是由多种猪源链引起的。临床表现为急性呼吸困难、关节炎、脑炎和急性死亡。这是猪最重要的疾病之一。近年来猪链球菌病在我国流行日趋严重,病原亦发生变化,其中最为重要的是猪链球菌2型呈世界范围分布,是一种人兽共患病原菌,该病曾先后在江苏南通、四川资阳等地引发公共卫生事件,造成极大的社会恐慌,严重危害养猪业的发展和人民的身体健康。摸清该病的流行规律,阐明致病机理,建立快速检测方法,研制高效安全、针对性强的猪链球菌疫苗,解决生产实际问题已成为迫切需要。 由上海市动物疫病预防控制中心、南京农业大学组成的课题组自1998年以来,对我国猪链球菌病进行了系统地研究,并研制了猪链球菌灭活苗(猪链球菌2型+马链球菌兽疫亚种)。本试验的目的是为了检验猪链球菌灭活苗实验室产品的免疫效果,为疫苗的大批生产及推广应用提供参考数据。 1 材料和方法 1.1 接种两种疫苗 试验用健康母猪和21日龄健康仔猪由上海市两个种猪场提供,两个猪场未接种链球菌疫苗,近两年也无链球菌病发生。15 g～20 g Balb/c小鼠购自上海复旦大学医学院。 1.2 菌兽疫种种5批 实验室研制生产猪链球菌灭活疫苗(猪链球菌2型+马链球菌兽疫亚种)5批,批号分别2000121420010312经纯检、细菌计数及无菌检查合格后用于试验。 1.3 优化中国兽药属c群 C74-63马链球菌兽疫亚种(Streptococcus equisubsp.zooepidemicus,SeZ),属兰氏分群C群,购自中国兽药监察所; HA9801猪链球菌2型(Streptococcus suistype 2,SS2)分离株,1998年8月从江苏省急性败血症死亡猪的实质器官中分离,中国兽医药品监察所鉴定,上海市动物疫病预防控制中心保存。 1.4 免疫状况试验 1.4.1 攻毒方法及攻毒案例 每批疫苗皮下注射15 g～20 g Balb/c小鼠20只,每只0.2 mL,15 d后加强免疫1次,每次0.2 mL,间隔14 d后,与对照小鼠10只,每组再分成2组(每组5只),分别用HA9801和C74-63攻毒,攻毒方法:腹腔注射2 LD50(5.5×102cfu)剂量的C74-63强毒菌液,腹腔注射2 LD50(1.2×108cfu)剂量的HA9801强毒菌液。观察10 d。 1.4.2 人工乳的选择 每批疫苗取妊娠母猪2头,分别于产前35 d～40 d和15 d～20 d各肌肉注射1次,每头3 mL。产仔后随机选出4头～5头仔猪人工哺乳作为对照。其余仔猪在吮食免疫母猪乳,仔猪3日龄时连同对照组,攻击2 LD50(4×107cfu)剂量的C74-63强毒菌液、2 LD50(1.5×109cfu)剂量的HA9801强毒菌液,观察10 d。 1.4.3 免疫抑制试验疫苗肌肉注射21日龄健康猪20头,其他批次疫苗各接种10头,每头2 mL,20 d后加强免疫1次,免疫剂量及免疫途径与首免一样。间隔15 d后,连同对照组,攻击2 LD50(4×107cfu)剂量的C74-63强毒菌液、2 LD50(1.5×109cfu)剂量的HA9801强毒菌液,观察10 d。 2 结果 2.1 猪链球菌2型ha98010株和马球形兽疫接种后的毒力 Balb/c小鼠经5批疫2000121420010226疫接种试验后,用猪链球菌2型HA9801株和马链球菌兽疫亚种C74-63株攻毒,疫苗平均保护率分别为90%(45/50)、74%(37/50)对照组全部死亡或发病(表1)。 2.2 批疫苗的保护率 哺乳仔猪经猪链球菌2型HA9801株和马链球菌兽疫亚种C74-63株攻毒后观察10 d,5批疫2000121420010226平均保护率分别为88.09%(37/42)、79.06%(34/43),对照组全部死亡(表2)。 (续表) 2.3 猪链球菌2型ha98010株与马球形兽疫株的毒力 经5批疫2000121420010226疫接种试验后,用猪链球菌2型HA9801株和马链球菌兽疫亚种C74-63株攻毒,疫苗对保育猪的平均保护率分别为90%(27/30)、76.7%(23/30),对照组全部死亡(表3)。 3 猪链球菌病灭活苗的免疫保护作用 R群猪链球菌2型与C群马链球菌兽疫亚种是当前我国猪链球菌病的两种主要病原。随着养猪业规模化程度的不断提高,同时由于近年来猪繁殖与呼吸综合征、猪圆环病毒 2型感染等疫病的发生与