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兰州大接杏生理分化期形态分化过程中dna的变化 果实成熟后，在生理上达到“开花状态”，然后根据其他条件中断花芽分化。花芽分化是与许多物质代谢有关的复杂的生化过程。按照细胞的全能性理论,花芽分化的所有步骤均已在分生细胞中预先编入了程序。分化的开始,实际上是成花基因解除阻遏的过程。成年阶段果树的核酸代谢是成花基因表达,使果树的茎端分生组织从营养状态转化为生殖状态的重要途径。有关研究在柑桔、苹果、美味猕猴桃等方面均有报道,但杏树花芽分化期核酸动态变化尚未见报道。杏树花芽多,败育花多,结果率低。研究杏树花芽分化期核酸动态变化,对于掌握杏树成花规律,人为控制花芽分化,提高花芽质量,进而提高杏树产量具有指导意义。 1 试验地和品种 试验于1996、1997年在兰州市西固区兰州炼油厂林场杏园进行。试验地为台地,土壤肥力较低,每年灌水2～3次。供试品种为10年生兰州大接杏(Prunus armeniacaL.)。每年冬季修剪,树势中庸。选树势基本相同的若干株供试验。 1.1 中果枝摘叶处理 用传统的摘叶法确定杏树花芽的生理分化期和形态分化期。每棵树固定同一方向的主枝,从5月20日开始,每隔10 d,每株树选两个中果枝摘叶(只留顶端一片叶,其余叶全部摘除),每次处理30个枝条,挂牌标记。共处理5～6次。同年秋季统计不同时期摘叶处理枝条上的花芽分化率(%)=花芽数×100/(花芽数+叶芽数)。同时统计不摘叶处理的枝条上的花芽分化率作为对照(CK)。第2年重复。 1.2 叶片和中果枝的取样 考虑到不同枝条的生长状况和结果习性不同,选用停止生长早、坐果相对稳定的中果枝(长15～30 cm)为试材。每棵树选同一方向主枝,从5月23日开始,每隔10 d取样1次,第6次后每隔30 d取样1次,共9次(由于10月13日叶片已落尽,故叶样只取8次)。每树剪取中果枝10枝,共100枝,用冰筒带回实验室。用自来水冲洗干净,吸水纸吸干。取下叶片(弃残叶、干叶),去除主脉、叶柄后剪碎;用刀片小心切下芽。样品混匀后,各分为两份,一份立刻用于核酸测定,另一份测水分。核酸的提取测定基本按朱治平的方法。用紫外吸收法测定总核酸含量,二苯胺显色法测定DNA含量,小牛胸腺DNA作标准样品。 2 结果与分析 2.1 花芽分化期的判断 1996、1997年摘叶法处理后秋季统计花芽分化率如表1。果树每年花芽分化时期的差异与气温有关。1997年春季气温偏高,整个物侯期提前,因而当年杏树的花芽分化期比1996年稍提前。但两年大体趋势相同。根据两年的试验结果可看出,5月下旬摘叶处理的枝条完全无花芽出现,说明此时还未进入花芽分化期。到6月上旬摘叶的枝条开始有少量花芽,以后逐渐增加,说明6月初有部分芽已进入花芽生理分化期。到7月上旬摘叶的枝条大部分(1996年为 88.8%,1997年为 94.3%)分化花芽,可见此时大部分花芽已完成生理分化,开始进入形态分化。 据李生等对兰州大接杏花芽分化的观察,花蕾原始体最早出现在6月21日,7月8～10日进入高峰期,即大部分花芽开始形态分化。这与我们在本试验中用摘叶法获得的结果基本相同。因此我们认为,兰州大接杏花芽的生理分化期从6月初至7月10日左右,7月中旬进入形态分化期。 2.2 月之后rna/dna比值的变化 由图1可见,总核酸和RNA含量变化趋势相同。在花芽生理分化初期(6月上旬),总核酸和RNA含量缓慢上升,DNA含量降低直至6月中旬,此时出现第1个RNA/DNA比值的高峰。之后DNA含量大幅度增加,到生理分化后期(7月4日)DNA、RNA含量均出现高峰,这一时期由于DNA增加幅度大于RNA,RNA/DNA比值开始下降。7月上旬,总核酸、RNA、DNA含量同时下降,且RNA降幅更大,因而RNA/DNA比值仍在降低。7月中旬,总核酸、RNA含量急剧增加,由于DNA含量的持续下降,到8月中旬才开始转为增加,因此RNA/DNA比值从7月中旬开始上升,到8月中旬形成第2个高峰。此时(花瓣开始分化)DNA含量迅速增加,并在9月9日再次形成高峰。这一时期也正是大部分雌蕊、雄蕊进入分化的时期。由图1中明显可见DNA含量和RNA/DNA比值均呈双峰曲线,但RNA/DNA比值的两次高峰恰好在DNA两次高峰出现之前,即生理分化前期和大部分雌蕊、雄蕊进入分化的前期。 有研究表明,顶芽中RNA和DNA的合成是花芽分化必需的生化过程。从本试验中可看到,兰州大接杏在花芽生理分化期芽内总核酸、RNA、DNA含量均增加,并在后期同时达到高峰,RNA/DNA比值也出现高峰,这与黄辉白等在柑桔上得到的结果相同。可见兰州大接杏在花芽生理分化期,芽内DNA、RNA的大量合成是其生化特征之一。 2.3 生理分化期总核酸的变化 由图2看出,兰州大接杏中果枝上的叶片在花芽生理分化前期(6月2