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药动学模型法测定五灵胶囊中乙素含量 五灵胶囊是由五味子、柴胡等中药组成的复方制剂。具有平肝健脾、活血化瘀、对乙型慢性肝炎的治疗效果好。五味子乙素是五味子的有效成分,具有显著降酶、抗脂质过氧化作用。五味子乙素在小鼠体内的药动学研究未见报道。本文对小鼠ig五灵胶囊后血浆中五味子乙素的药代动力学进行了研究,为临床用药提供实验依据。 1 药物、试剂和标准品 美国tsp-100型高效液相色谱仪;昆明小鼠购自第四军医大学动物中心,动物合格证号:陕医动证字SC×K(军)2002-05;五灵胶囊,由西京医院制剂室提供,批五味子乙素供试品(乙素供试品),由本室提取纯化,为白色结晶,熔点117～119℃,经紫外、红外光谱、EI-MS质谱确证,纯度96%;五味子乙素对照品(乙素对照品),由中国药品生物制品鉴定所提供;甲醇色谱纯,Merck公司产品;水为三蒸水;硫酸胺为分析醇,西安化学试剂厂生产。 2 方法和结果 2.1 铬ct-18的铬柱4.6mm150mm，粒度：5m-m。流动相为甲醇水80.20。流量1.0 ml/min;检测波长254 nm;柱温为室温。 2.2 药液制备方式 昆明小鼠456只,雄性,置相对湿度45%～75%、温度(25±1)℃动物试验室饲养3 d,禁食过夜,自由饮水,次日按体重分层,随机分组,每时间点为一组,每组4只,五灵胶囊按16.6 g/kg(相当于人体给药剂量10倍,其中含五味子乙素45.0 mg)ig给药,分别在0.16,0.32,0.5,1.0,1.5,2.0,2.5,3.0,3.5,4.0,4.5,5.0,6.0,7.0,8.0,10.0,12.0,14.0,18.0,20.0,24.0,26.0,28.0,32.0 h眼眶采血,置于肝素钠的离心管内,室温放置30 min,3 000 r/min离心10 min,分离血浆,每组血浆合并置-20℃冻存。乙素供试品按45.0 mg/kg ig给药,分别在0.16,0.32,0.5,1.0,1.5,2.0,3.0,3.5,4.0,4.5,5.0,6.0,8.0,10.0 h采血,同上法操作得血浆,-20℃冻存。 2.3 试验溶液的制备 2.3.1 血浆供试品溶液 取上述依时间点取每组小鼠混匀血浆0.7 ml,分别加0.25 g硫酸胺,振荡混匀1 min,再加乙腈-甲醇(4∶1)溶液4 ml,振荡混匀3 min,3 000 r/min离心20 min,取上清液置小蒸发皿内,于40℃水浴上用氮气吹干,残渣加色谱甲醇溶解至1 ml,摇匀,-20℃放置过夜。次日用0.22 μm微孔滤膜抽滤,作为血浆供试品溶液。取上述乙素供试品依时间点取每组混匀血浆0.7 ml,按供试品溶液的制备方法制得血浆乙素供试品溶液。另取五灵胶囊缺五味子阴性样品按2.2和供试品溶液的制备方法制得的阴性供试品溶液。 2.3.2 对照品溶液的制备 取50℃真空干燥4 h五味子乙素对照品适量,精密称定,加入0.7 ml空白血浆中,按血浆供试品溶液的制备方法制备得50 μg/ml的对照品溶液。精密吸取血浆对照品溶液、血浆供试品溶液、血浆乙素供试品溶液和阴性供试品溶液各20 μl,注入液相色谱仪在UV-204 nm处测定吸收面积值,在此条件下,对照品供试液、乙素供试品溶液和供试品溶液吸收入血的其它成分或代谢产物均可达到基线分离,峰形基本对称,在同一整留时间有色谱吸收峰,而阴性供试品溶液在同一滞留时间无色谱吸收峰。见图1。 2.4 乙素血浆浓度检测 取空白血浆0.7 ml,一式7份,加入乙素对照品溶液,使血浆终浓度分别为0.5,1.0,2.0,4.0,8.0,16.0,32.0 μg/ml,按血浆供试品的处理方法制备并测定峰面积,以乙素峰面积(Y)对乙素血浆浓度(C)作图,得回归方程Y=8 457+26 408·C,r=0.999 5。乙素在0.5～32.0 μg/ml范围内呈良好的线性关系,最低检测限为30 ng/ml。 2.5 仪器测定的稳定性考察 精密吸取血浆供试品溶液测定日内、日间面积并计算含量,日内每3 h测定1次,共测5次,日间每日测1次,共测5次。测得血浆供试品日内含量分别为:0.750,0.748,0.752,0.751,0.756 μg/ml,平均含量为(0.751±0.029)μg/ml,RSD=0.39%。测得日间含量分别为0.751,0.753,0.740,0.760,0.760 μg/ml,平均含量为(0.753±0.082)μg/ml,RSD=0.39%,仪器测定的稳定性符合含量测定要求,供试品溶液在测定期间是稳定的,可满足测定要求。 取正常小鼠血浆分成5份,分别加入4 μg/ml的五味子乙素对照品,按血浆供试品溶液制备得对照品溶液。2人重复测得5次含量分别为:0.7