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柴胡与五灵丸对慢性肝损伤小鼠血清和肝组织结构的影响 0 抗炎及慢性肝损伤的制剂 柴胡具有舒肝、补气、阳肝、舒肝的功能。它被用来治疗肝气郁结、胸闷、胸痛和其他疾病。现代药理研究表明，柴胡具有抗炎、解热、抗肝损伤和溃疡的作用。我们观察并比较了柴胡和五灵丸主要药物的慢性肝损伤，为临床药物的开发提供了基础，并进一步探讨了其功能机制。 1 材料和方法 1.1 试验动物、试剂和仪器 柴胡 Bupleurum chinense DC. 陕西白水产,取柴胡粗粉,加10倍于药材量的750 mL·L-1乙醇回流提取2次,每次1 h,滤过,合并2次滤液,回收乙醇,减压浓缩至稠膏供试验用,每克稠膏含生药5.21 g. 五灵丸由西安博爱制药有限公司提供,谷丙转氨酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALP)、胆碱酯酶(CHE)试剂盒由北京中生公司提供. 脂质过氧化物(MDA)、一氧化氮(NO)、谷胱苷肽(GSH)由南京建成生物工程研究所提供. D-GlaN由重庆医科大学教研室提供,脂多糖(LPS),Sigma 公司产品,卡介苗(BCG)卫生部成都生物制品研究所提供,取1支(10人份)加溶剂2 mL 溶解作为供试品液,IL-2、IL-6试剂盒由解放军总医院科技开发中心放免所提供. 昆明小鼠,BALB/c小鼠由本校动物中心提供,动物合格证号,陕西动证字08-013号. 1.2 方法 1.2.1 试验组和模型组的血清未固定指标检测各相关血清中alt和alp的表达 昆明小鼠40只,体质量(20.1±2.1) g,雄性,随机分成4组,置温度(22±3)℃,湿度60%~70%实验室,适应环境3 d后试验,试验日正常组sc生理盐水2 mL·kg-1,余组小鼠sc 200 mL·L-1的CCl4植物油溶液2 mL·kg-1,每隔3 d注射1次,第3次注射后次日正常组、模型组ig蒸馏水10 mL·kg-1,柴胡组ig柴胡稠膏1.92 g·kg-1(相当于生药10 g),五灵丸组ig五灵丸原料粉4.50 g·kg-1,连续给药10 d,同时试验组小鼠依旧隔3 d sc 200 mL·L-1的CCl4植物油溶液,正常组sc生理盐水. 10 d末次给药后,小鼠禁食给水,12 h后眼眶取血,离心,取血清测定ALT, CHE,取肝组织用冰冷生理盐水冲洗,置冰浴中匀化制得100 mL·L-1的肝匀浆,4℃离心力12 216g,离心20 min,取上清测定ALT, ALP, CHE, MDA, GSH. 1.2.2 小鼠ipd-glan的单次给药实验 昆明小鼠40只,体质量(20.0±1.5)g,雄性,随机分为4组,实验室条件同上,高脂饲料饲养,饮用50 mL·L-1乙醇,实验日正常组ip生理盐水10 mL·kg-1,余组小鼠ip D-GlaN溶液400 mg·kg-1,隔3 d注射1次,第3次注射后次日开始给药,方法与剂量同前. 连续给药2 wk,同时各实验组小鼠依旧隔3 d ip D-GlaN 400 mg·kg-1,正常组ip生理盐水10 mL·kg-1. 2 wk末次给药后小鼠禁食给水,12 h后眼眶取血,样品制备与测定方法同前. 1.2.3 试验分组和给药 BALB/C小鼠40只,体质量(19.8±2.0) g,雄性,随机分成4组,实验室条件同上,试验日正常组小鼠尾iv生理盐水0.1 mL/只,余组小鼠尾iv BCG 0.1 mL/只,注射BCG 6 d后,正常组小鼠尾iv生理盐水0.1 mL/只,试验组小鼠尾iv LPS 90μg/只,次日正常组小鼠两前肢腋窝处注射生理盐水0.1 mL/只,试验组小鼠注射完全佐剂0.1mL/只. 同时正常组和模型组ig蒸馏水10 mL·kg-1,柴胡组ig柴胡稠膏1.92 g·kg-1,五灵丸组ig五灵丸4.50 g·kg-1. 给药第6 d,正常组小鼠ip生理盐水0.1 mL/只,试验小鼠ip LPS 100 μg/只,继续给药至12 d,末次给药后,正常组小鼠尾iv生理盐水0.1 mL/只,试验小鼠尾iv LPS 120 μg/只,禁食给水,12 h后小鼠眼眶取血,离心,取血清测定ALT, AST,取肝组织用冰冷生理盐水冲洗,置冰浴中匀化制得100 mL·L-1肝匀浆, 4℃离心12 216g,取上清3 mL,加88 mmol·L-1氯化钙0.3 mL,充分摇匀,4℃静置15 min,离心力12 216g离心40 min,弃除上清,沉淀加0.3 mol·L-1磷酸缓冲液1 mL溶解作为微粒体供试品液,取供试品液0.5 mL按文献测定NO含量. 无菌状态下取各实验小鼠脾脏碾磨,用RPMT 1640完全培养液制成1×109·L-1的脾细胞悬液,取24孔板加细胞悬液1 mL/孔,再加Con A使其终浓度为5 mg·L-1,置37℃ 50 mL·L-1