奶牛超数排卵的实验研究.docxVIP

奶牛超数排卵的实验研究 奶牛超数排卵是胚胎移植技术的重要因素之一。牛超数排卵的目的是最大限度地获得受精卵和可用胚胎 (Foote et al., 1986) , 然而, 在实际生产中牛的超排反应和胚胎质量差异性很大。卵巢反应的差异性受许多因素的影响, 如促性腺激素种类 (Elsden et al., 1978) 、批号 (Murphy et al., 1984) 、处理时间 (Lindsellet al., 1986) 、剂量 (Pawlyshyn et al., 1986) 、季节 (Massey et al., 1984) 、牛的品种 (Saumande et al., 1978) 、年龄 (Hasler et al., 1981) 、处理时的卵巢生理状态 (Moor et al., 1984) 、营养状况 (Hendrickset al., 1986) 、繁殖史 (Hasler et al., 1983) 和重复超排次数 (Donaldson et al., 1983) 等。超排就是在外源生殖激素作用下对母牛生殖系统所产生的一系列复杂生理过程。 1 发情周期的情况 在自然状态下, 动物卵巢上约有99%的有腔卵泡发生闭锁而退化, 只有1%的能发育成熟而排卵。超数排卵的过程就是应用超过体内正常水平的外源促卵泡激素, 使将要闭锁的有腔卵泡发育成熟而排卵。实验证明, 动物有腔卵泡闭锁之前, 注射FSH或PMSG, 能使大量卵泡不闭锁而发育成熟;在排卵之前注射LH或HCG补充内源性LH的不足, 可以保证大量成熟卵母细胞同时排卵, 于是便形成了超数排卵。 近年来, 随着人们对牛卵巢卵泡波动力学研究的进展, 推动了对牛超数排卵的研究和应用。有些研究人员 (Adams et al, 1984) 已经阐述了FSH周期波, 母牛每个情期由下丘脑释放FSH 2次或3次, 相应的卵泡活动也有2个或3个波。在每个周期波期间, 有一个卵泡将成为优势卵泡, 它产生抑制素进一步抑制其它次级卵泡发育而使其闭锁。而在卵泡发育期间用FSH处理, 为一些卵泡提供了FSH, 使其继续生长发育, 从而克服了由优势卵泡产生的抑制作用。如处在黄体期, 优势卵泡最终退化形成闭锁黄体, 新的卵泡波又开始。实验证明, 大多数牛在发情周期中存在2~3个卵泡发生波。最典型的是在牛卵巢排卵后不久开始出现第1个卵泡波, 8~10d后出现第2个卵泡波。对于有2个卵泡波的母牛来讲, 从第2个卵泡波中出现的优势卵泡将会排卵。而对于拥有3个卵泡波的母牛来讲, 在发情周期的18d从第3个卵泡波中出现的优势卵泡将会排卵。通常超排处理是在牛发情周期的8~12d (发情天为0d) , 最初这一时间是根据卵巢中卵泡波正处在成熟的时间来确定的。Lindsell等 (1986) 证明在发情周期的第9d开始超排比第3d、6d、12d时超排效果好, 这一结果被最近的超声波探测所证实, 拥有3个卵泡波的母牛, 第2个卵泡波正是在排卵后的第8.5d开始 (发情的9.5d) , 而拥有2个卵泡波的母牛, 是在排卵后的第9.5d开始, 即发情的第10.5d开始。实际上, 有2个卵泡波的母牛的发情周期 (18~20d) 比3个卵泡波的母牛的发情周期 (21~23d) 短。因此, 通过以前发情周期的长短可为母牛选择最佳的超排时间提供依据。无论拥有2个还是3个卵泡波的母牛, 发情后8~12d是最有可能出现第3个卵泡波的时间 (Ginther et al 1989) 。超排开始时间与新的卵泡波发生时间吻合时, 超排反应最好 (Nasser et al, 1993) 。 2 fsh及其类似物 有三种不同的促性腺激素用于诱导母牛超排, 即FSH, PMSG或马绒毛膜促性腺激素 (e CG) 和人绒毛膜促性腺激素 (h CG) 。前列腺素 (PGF2a) 或其类似物, 在超排程序中用于诱导黄体溶解, 使母牛发情和排卵。猪垂体FSH是一种部分纯化的提取物, 其中含有FSH和LH成分。由于FSH在母牛体内的生物性半衰期估计为5h或更短 (Laster等., 1972) , 所以, 超排时必须每天注射2次 (Chupin等., 1985) 。通常的程序是递减剂量连续4d或5d注射, 每天两次。处理开始后的48~72h, 注射PGF2a消黄, 36~48h内母牛发情并出现排卵前的LH峰, 随后24~36h后排卵 (Diop等., 1988) 。 PMSG是具有FSH和LH活性的糖蛋白, 已证明在母牛体内的半衰期为40h, 动物体内存在达10d以上。在正常超排时注射一次, 48h后注射PG。由于PMSG半衰期长, 从而引起对卵巢的持续刺激, 出现不排卵卵泡、内分泌异常和胚胎质量降低等现象 (Booth WD1975) 。在第一次输精时