rp-hplc法同时测定栀子中3种成分的含量.docxVIP

rp-hplc法同时测定栀子中3种成分的含量 栀子是蔷薇科植物的干燥成熟果实。这是一种常见的药物品种之一，具有清火除苦、清热利尿、凉血解毒的功效。黄酮、环烯醚萜苷和水溶性色素类是其主要有效部位。栀子苷等黄酮苷类具有抗炎、解热、利胆和轻泻作用,西红花苷等水溶性色素类成分具有抗动脉粥样硬化及降血脂作用。栀子多用栀子苷为定量控制指标,进行质量控制[1、5]。 栀子生长地区非常广泛,农家种植品种较多,不同地区种植的栀子差异很大。笔者收集了河南、广西、江西、贵州等栀子主产区的不同产地的14批样品,采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)法对样品中栀子苷、西红花苷-Ⅰ、西红花苷-Ⅱ的含量进行测定,以期为栀子的质量评价提供科学依据。 1 药品、试剂与标准品 HPLC仪,包括2695溶剂管理系统、2996二极管阵列检测器、柱温箱、Empower 2工作站(美国Waters公司);ASS150超声波提取器(济宁科特超声电子有限责任公司);LIBROR-160DPT万分之一分析天平(日本岛津公司);AE240十万分之一分析天平(瑞士Mettler Toledo公司)。 甲醇为色谱纯(德国Merck公司),水为超纯水,其余试剂均为分析纯;栀子苷对照品(中国药品生物制品检定所,批号:110749-200612,供含量测定用);西红花苷-Ⅰ、西红花苷-Ⅱ标准品(金测分析技术(天津)有限公司,供含量测定用,纯度均98%);供试药材来源见表1,经河南省中医药研究院都恒青研究员鉴定均为茜草科植物栀子G.jasminoides Ellis的成熟果实,凭证标本存放于河南省中医药研究院中药室。 2 方法和结果 2.1 标准曲线及线性结果 色谱柱:Thermo ODS C18(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:甲醇(A)-0.1%磷酸水溶液(B),梯度洗脱(0→10 min,A为10%→20%;10→25 min,A为20%;25→32 min,A为20%→52%;32→40 min,A为52%;40→42 min,A为52%→75%;42→50 min,A为75%;50→51 min,A为75%→10%);流速:1.0 m L·min-1;柱温:40℃;检测波长:238 nm(栀子苷)、440 nm(西红花苷-Ⅰ、西红花苷-Ⅱ);进样量:10μL。按上述色谱条件,分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各10μL,注入液相色谱仪。结果表明,栀子苷、西红花苷-Ⅰ和西红花苷-Ⅱ的色谱峰分离良好。色谱见图1。 2.2 溶液的制备 2.2.1 %分类测定栀子苷的表达 精密称取栀子苷对照品与西红花苷-Ⅰ、西红花苷-Ⅱ标准品,加甲醇制成每1 m L分别含栀子苷224μg、西红花苷-Ⅰ71.0μg、西红花苷-Ⅱ13.0μg的混合溶液,即得。 2.2.2 超声处理法 精密称取栀子细粉0.2 g,置具塞三角瓶中,精密加入甲醇25 m L,称定重量,超声处理30 min,取出,放冷,再称定重量,用甲醇补足失重,摇匀,过滤,续滤液用0.45μm微孔滤膜滤过,即得。 2.3 线性范围与检出限 精密吸取混合对照品溶液2、5、10、15、20、25μL,注入液相色谱仪,按上述色谱条件测定栀子苷、西红花苷-Ⅰ、西红花苷-Ⅱ色谱峰峰面积积分值,并以峰面积积分值(Y)为纵坐标,进样量(X)为横坐标,进行线性回归,得3种成分的回归方程、相关系数与线性范围,见表2。 2.4 栀子苷的测定 取河南唐河同一批次的供试品溶液,按上述色谱条件分别于0、2、4、6、8、12、24 h注入液相色谱仪,进样10μL。结果,栀子苷的平均峰面积为5 747 259,RSD=0.49%(n=7);西红花苷-Ⅰ的平均峰面积为4 087 163,RSD=0.76%(n=7);西红花苷-Ⅱ的平均峰面积为16 199,RSD=0.92%(n=7),表明供试品溶液在24 h内稳定性较好。 2.5 色谱条件分析 精密吸取同一供试品溶液10μL,注入液相色谱仪,按上述色谱条件进行分析,连续重复进样6次。结果,栀子苷、西红花苷-Ⅰ、西红花苷-Ⅱ的RSD分别为1.32%、1.52%、1.50%(n=6),表明本方法精密度较好。 2.6 不同水红树莓苷、西红豆苷含量的测定 取同一批栀子药材,照“2.2.2”项下方法平行制备6份供试品溶液,按上述拟定的含量测定方法操作。结果,栀子苷的平均含量为45.66 mg·g-1,RSD=1.61%(n=6);西红花苷-Ⅰ的平均含量为7.792 mg·g-1,RSD=1.68%(n=6);西红花苷-Ⅱ的平均含量为1.684 mg·g-1,RSD=1.23%(n=6),表明本方法重复性较好。 2.7 供试品溶液制备 取已知含量(栀子苷:46.71 mg·g-1,西红花苷-Ⅰ:7.20 mg·g-1,西