抗菌活性成分分离及其活性导向追踪研究.docxVIP

抗菌活性成分分离及其活性导向追踪研究 近年来，抗生素对感染疾病的治疗做出了重要贡献，但随着其临床使用的长期广泛使用，尤其是不合理使用，毒副作用日益突出，细菌对抗生素的依赖也越来越严重。抗生素的单用率无法满足大多数患者的需求。人们逐渐关注中药的抗菌作用以及与抗生素联合抗菌。含笑属是木兰科含笑族 (tribe Michelieae) 含笑亚族 (sutribe Micheliinae) 植物, 约有80种, 是木兰科中的第二大属。分布于亚洲热带及亚热带。我国约有70种, 主要产于西南部至东部, 以西南部较多;适宜生长于温暖湿润气候、酸性土壤, 为常绿阔叶林的重要组成树种。而壮丽含笑 (Michelia lacei) 为含笑属 (Michelia) 植物中较原始而特殊的种类, 为常绿乔木, 分布于我国云南西南部, 生于海拔1500 m的林中, 枝粗壮, 花梗具佛焰苞状苞片约5枚, 心皮狭卵圆形具3-4 mm的花柱等特征。含笑花具有祛淤生新, 活血止痛之功效。临床上主要用于治月经不调, 痛经, 胸胁间作痛。 含笑属中主要含有单萜和倍半萜以及它们的含氧衍生物, 含量较大且结构种类繁多, 且倍半萜类化合物的含氧衍生物多有较强的香味和生物活性。其中分离出的大多数倍半萜内酯, 如匙叶桉叶油醇、小白菊内酯被证明有抗菌、抗癌等生理活性。另有部分学者研究含笑花、叶、根茎的挥发油并对其成分进行分析鉴定, 发现含笑挥发油的成分主要为倍半萜类化合物。含笑花挥发油化学成分包括醇类、烯烃类化合物及少量烷烃及酯类。含量最高的化合物为:橙花叔醇 (76.37%) 、紫穗槐烯 (6.38%) 、δ-杜松烯 (4.26%) 、α-胡椒烯 (1.40%)。程永现等通过初步的药理筛选, 发现壮丽含笑的脂溶性提取物对两种人肿瘤细胞株HCT-8及SIHa的抑制效果较好, 在此基础上他们从壮丽含笑嫩枝的乙醇提取物中分离得到6个化合物, 包括5个倍半萜及1个苯丙素苷。其中5个是倍半萜类化合物分别为香树醇、异香树醇、匙叶桉叶油醇 (spathuleno1) 、小白菊内酯 (Parthenollde) 和11, 13-de-hydro1anuginolide。且研究表明其中的spathulenol有中等抗真菌活性, Parthenollde有较强的细胞毒活性、5-HT拮抗作用和抑制平滑肌收缩作用等。但壮丽含笑的抗菌活性, 尤其是抗耐药菌活性的研究暂未见报道。本次实验主要是从天然药物壮丽含笑中分离提取出活性段或活性单体, 针对细菌做药敏实验, 考察其抗菌活性, 这对从植物中寻找抗MRSA的活性成分具有指导意义。 1 材料和方法 1.1 材料表面 1.1.1 仪器、设备和仪器 薄层层析硅胶板 (青岛海洋化工厂分厂, 规格:50mm×100 mm, 活度:三色分开, 厚度:0.20-0.25 mm, 批号 、HHS-Ⅱ电热恒温水浴锅 (山西省文水医疗器械厂) 、SB-2000减压旋转蒸发器 (上海爱明仪器有限公司) 、WFH-203三用紫外分析仪 (上海精科实业有限公司) 、SHB-Ⅲ循环水式多用真空泵 (郑州长城科工贸有限公司) 、FA1004N电子天平 (上海精密科学仪器有限公司) 、托盘天平。微生物培养皿、Ⅳ型微量加样器 (上海求精生化仪器有限公司) 、PYX-PHS-4050搁水式电热恒温箱 (上海市跃进医疗器械一厂) 、CHA-213电子显微镜 (日本OLYMPUS) 、YXQ-SG41-280电热手提压力蒸汽消毒器 (上海医用核子仪器厂) 、SW-CJ-IB净化工作台 (苏州净化设备厂) 、移液枪。 1.1.2 实验动物及微生物 壮丽含笑的干燥嫩枝叶 (由成都军区昆明总医院提供) 。国际标准菌株:金黄色葡萄球菌 (ATCC25923) 、大肠埃希菌 (ATCC25922) 、铜绿假单胞菌 (ATCC27853) 、白色念珠菌 (ATCCY0109) (中国药品生物制品检定所提供) ;耐甲氧西林金黄色葡萄球菌:MRSA 92、MRSA 135、MRSA 144、MRSA 8 (成都军区昆明总医院药学部微生物室提供) 。石油醚、乙酸乙酯、甲醇、乙醇、正丁醇、蒸馏水、二甲基亚砜 (天津化学试剂有限公司, 批号: 、M-H水解酪蛋白琼脂 (杭州天和微生物试剂有限公司, 批号:091104) 、M-H肉汤 (杭州天和微生物试剂有限公司, 批号 、沙保罗氏琼脂 (杭州天和微生物试剂有限公司, 批号:080826) 、80-100目硅胶、200-300目硅胶 (青岛海洋化工厂分厂, 批号:00591) 。 1.2 方法 1.2.1 丁醇的制备 取壮丽含笑粗粉 (3920 g) , 用80%乙醇冷浸 (第1次1周, 后4次各浸泡3