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迷迭香酸精制工艺的研究 1 迷迭香酸提取 香酸（rosa）是一种含有多酚基的酸，最初由elis发现，并在香蒲酸中发现。1958年,由Scarpati和Oriente等人首次用化学降解法确定了其结构见图1,分子式是:C18H16O8,化学名称为[R(E)]α-{[3-(3,4-二羟基苯基)-1-氧代-2-丙烯基]氧基}-3,4-二羟基苯丙酸。 迷迭香酸主要分布于唇形科(Lamiaveae),紫草科(Boraglnaceae)和伞形科(Apiacea)植物中。国内外研究表明迷迭香酸具有抗氧化、免疫抑制、抑制微生物、抗炎、抗血栓和抗血小板聚集、抗过敏,保护神经元等生物活性,其在食品、化妆品、医药等方面拥有广泛的应用价值,但合成成本高,步骤复杂,难于工业化生产。而天然产物研究开发正日益受到人们的重视,目前天然产物中迷迭香酸的分离纯化方法繁琐,纯化过程损失大,且纯度普遍不高。自1966年美国Rohm and Haas公司合成第一种大孔网状吸附树脂(Macroporous adsorbents)以来,各种不同性能的合成吸附树脂相继问世,目前在环境保护、医药工业、化工、分析化学等领域都已取得了显著的成效。近年来发展起来的大孔吸附树脂吸附洗脱法具有选择性好,吸附容量大,再生处理方便及吸附迅速、解吸容易等优点,在天然产物工业化提取分离中得到广泛应用。陈丛瑾等利用大孔吸附树脂分离纯化得到香椿叶总黄酮;樊君等利用大孔吸附树脂分离纯化枣渣中的三萜酸,纯度达80%以上;胡晓丹利用大孔吸附树脂对紫苏叶花色苷进行了精制;向海艳全面而且系统地研究了大孔吸附树脂技术纯化白藜芦醇的最佳条件。本文利用大孔吸附树脂,从紫苏色素中直接分离纯化迷迭香酸,建立了一种快速、简单的迷迭香酸分离纯化方法。 2 实验部分 2.1 高相滤酸树脂 实验原料:紫苏色素,青岛红星化工集团天然色素有限公司。 迷迭香酸标准品:SIGMA公司。 NKA-Ⅱ、NK109、D4006、AB-8、D4020、X-5大孔吸附树脂,南开大学化工厂;无水乙醇,天津市四通化工厂;乙酸乙酯,天津市天新精细化工开发中心;磷酸,天津市化学试剂六厂;以上试剂均为分析纯。乙腈,色谱纯,科密欧化学试剂公司。 高效液相色谱检测仪,LC-20AT,日本岛津制作所;HL-2恒流泵、BSZ-100自动分部收集器,上海沪西仪器厂。 2.2 高效液相色谱分析方法 2.2.1 检测波长和温度 所用色谱柱为VP-ODS(150×4mm),检测波长为280nm,流动相为水(含0.1%H3PO4):乙腈(60:40,V/V),流速为0.5m L/min。 2.2.2 回归方程的制备 取迷迭香酸标准品10.000mg,用三重蒸馏水配成100m L水溶液,取此溶液10m L,8m L,6m L,4m L,2m L,分别置于干净具塞试管中,并加三重蒸馏水体积为0,2m L,4m L,6m L,8m L,充分混匀后,用高效液相色谱检测。以峰面积与标准溶液的质量百分比浓度C(μg/m L),求得回归方程。迷迭香酸的回归方程为:Y=8424.8X+16953,R2=0.9994。表明迷迭香酸浓度在20.000~100.000mg/L范围内呈良好的线性关系。 2.2.3 样品测定 取样品溶液,稀释至一定体积后,用高效液相色谱测定,通过回归方程计算迷迭香酸浓度。 2.3 实验方法 2.3.1 香酸粗提液的制备 取一定量紫苏色素溶液稀释一定浓度后过滤备用,即为上柱用的迷迭香酸粗提液。 2.3.2 树脂的选择 2.3.2. 丙酮、甲醇和乙醇 树脂装填后,以5%盐酸溶液浸泡24h,水洗呈中性,放净水。用0.5倍树脂体积的丙酮、甲醇或乙醇浸泡24h。用2倍柱床体积(BV)丙酮、甲醇或乙醇,以2BV/h的流速通过树脂层,并浸泡10h。用丙酮、甲醇或乙醇,以2BV/h的流速通过树脂层,洗至流出液加水几乎不呈混浊状,并以水洗净丙酮、甲醇或乙醇。用2BV的5%盐酸溶液,以4BV/h的流速通过树脂层,并浸泡2h,而后用水以同样流速洗至出水p H中性,即可使用。 2.3.2. 洗脱香酸平衡浓度测定 准确称取预处理过的6种型号的大孔吸附树脂各1.000g,用少量乙醇湿润后再用蒸馏水洗去乙醇,吸干其表面水分后置于250m L三角瓶中,各加100m L迷迭香酸粗提液,置于水浴摇床,25℃下100r/min振荡24h后,测定其平衡浓度。除去迷迭香酸粗提液后,加入50m L乙酸乙酯于各吸附完全的树脂中解吸5h(条件同上),测定洗脱液中的迷迭香酸含量。按下列公式计算各树脂吸附量、吸附率、解吸率。 式中:Q-吸附量(mg/g);C0-初始浓度(mg/L);Ce-平衡浓度(mg/L);V1-加入的原液体积(L);m-树脂用量(g);E-吸附率(%);D-解吸率(%);C1-洗脱液浓度(m