紫外分光光度法和高效液相色谱法测定淫羊藿总黄酮的比较.docxVIP

紫外分光光度法和高效液相色谱法测定淫羊藿总黄酮的比较 绵羊：成人疾病是雅属植物的少量换句话说。爱斯基诺真菌病（sieb.etzec.）日本电视台、纯羊茅湿泽、s.壳干旱生。男人和女人。s.印度-朝鲜色情药物的提取量。它对肾脏也有好处。现代研究表明,其具有抗骨质疏松、增强性功能、增加心脑血管血流量、促进造血功能、增强免疫、抗衰老、抗炎、抗肿瘤等多方面药理作用,黄酮类成分是其主要活性成分。因此,淫羊藿总黄酮含量常作为评价淫羊藿质量和提取分离工艺的指标。目前,淫羊藿总黄酮的含量测定方法多采用紫外分光光度法,以淫羊藿苷为指标性成分,在270 nm波长处测定,或是使黄酮化合物与铝盐络合后再用分光光度法(比色法)测定。这些方法因特异性差、不同黄酮类化合物吸收系数不同等可导致测定结果的偏差。本文建立了淫羊藿总黄酮HPLC分离、紫外光谱定性结合主成分自身对照定量和其他成分以淫羊藿苷为对照累计定量的方法,测定了淫羊藿总黄酮提取物中总黄酮的含量,并与紫外分光光度法的测定结果进行了比较,以探讨提高淫羊藿总黄酮含量测定可靠性的方法。 1 化学成分分析 Beckman DU-640分光光度计;Agilent 1100LC/DAD/MSD系统,包括在线真空脱气机、高压二元梯度泵、恒温自动进样器、柱温箱、二极管阵列检测器(DAD)、电喷雾离子化-离子阱质谱检测器(ESI-MSD)和Agilent化学工作站。 对照品朝藿定C、淫羊藿苷、鼠李糖基淫羊藿次苷-Ⅱ和宝藿苷Ⅰ由本实验室从自制淫羊藿总黄酮提取物分离,结构经MS、1H-NMR、13C-NMR确证,纯度经HPLC分析在98%以上。甲醇、乙腈均为色谱纯,购自默克(MERCK)公司,水为Milli-Q水。 2 方法和结果 2.1 紫外分光光度法测定的总黄酮 2.1.1 对照品溶液的制备 精密称取淫羊藿苷约5 mg,置于50 mL量瓶中,以甲醇溶解并定容至刻度,摇匀,0.45μm微孔滤膜滤过,取续滤液,即得浓度为98.00μg·mL-1的淫羊藿苷对照品溶液。 2.1.2 滤膜的制备 精密称取淫羊藿总黄酮提取物约100 mg,置于100 mL量瓶中,加适量甲醇溶解并定容至刻度,摇匀,0.45μm微孔滤膜滤过,取续滤液,即得。 2.1.3 测量波长的选择 对照品溶液及供试品溶液经紫外扫描(190～400 nm),发现两者都在270nm处有最大吸收峰,故确定检测波长为270 nm。 2.1.4 吸收度测定方法 精密吸取对照品溶液0.25,0.50,1.00,1.50,2.00,2.50 mL,分别置于10mL量瓶中,用甲醇稀释至刻度。以甲醇为空白对照,用紫外分光光度计在270 nm处测定吸收度。以吸收度值A对淫羊藿苷浓度C进行回归,得回归方程为: A=3.50×10-2C+9.48×10-3r=0.9996 表明淫羊藿苷在2.45～24.50μg·mL-1范围内线性关系良好。 2.1.5 精密度和溶液中淫羊硝苷的稳定性测定 取线性范围内的3个浓度(4.90,14.70,24.50μg.mL-1)的对照品溶液,每个浓度制备3份,于0,2,4,6,8,12,24,36,48,60 h进行测定,考察日内、日间精密度和溶液中淫羊藿苷的稳定性。结果:淫羊藿苷的日内精密度RSD(n=6)小于0.84%,日间精密度RSD(n=6)小于0.83%,溶液中淫羊藿苷在60 h内稳定。 2.1.6 续滤液的制备 精密称取淫羊藿总黄酮提取物适量,分别配成低、中、高3个浓度(约5,15,25μg.mL1),每个3份,用甲醇溶解并定容于25 mL量瓶中,摇匀,0.45μm微孔滤膜滤过,取续滤液进行测定。结果RSD(n=3)小于2.4%,方法的重复性良好。 2.1.7 加标回收率试验 取已知含量的淫羊藿总黄酮提取物0.37 mg共9份,分别置于25 mL量瓶中,精密加入对照品溶液1.50,2.25,3.00 mL各3份,用甲醇定容至刻度,按“2.1.4”项下方法测定。结果低、中、高3个水平的回收率(n=3)分别为95.0%(RSD=0.40%),96.2%(RSD=2.0%),98.0%(RSD=0.82%);平均回收率(n=9)为96.4%。 2.1.8 用量的稀释稀释 精密吸取供试品溶液0.50 mL 3份,分别置于25 mL量瓶中,用甲醇稀释至刻度。在270 nm处分别测定吸收度,将吸收度代入标准曲线计算得样品中总黄酮的含量(n=3)为56.6%,RSD为0.59%。 2.2 hplc法测定了绵羊岭总黄酮的含量 2.2.1 检测波长m/z-水气流场n Zorbax SB-C18(250 mm×4.6 mm,5μm)分析柱;流动相以水(A)-乙腈(B)梯度洗脱(0 min,22%B;15 min,28%B;20 min,35%B;45 mi