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白头翁提取物中总皂苷及主要皂苷类成分的含量测定 白头翁是毛科植物白头翁的干燥生根，具有清热解毒、凉血止泻的功效。主要含有木脂素类、黄酮类、三萜及其苷类和甾醇类成分。白头翁经乙醇提取得到的有效部位具有较好的抑菌作用, 现代药理研究显示, 白头翁单体化合物及提取液均具有明显的体内外抗肿瘤作用, 此外在抗炎方面也呈现出显著的药理活性, 具有较大的药用价值。因此, 本文以白头翁提取物为研究对象, 探讨白头翁提取物中总皂苷的含量测定方法, 并采用HPLC-ELSD对白头翁提取物进行多指标成分的含量测定, 以实现多组分控制提取物的质量。 1 白头翁皂苷的提取 UV2550型紫外分光光度计、AUW220D型电子分析天平 (日本, 岛津) , Waters 2695型高效液相色谱仪 (美国Waters公司Empower工作站) , ELSD-2000型蒸发光散射检测器 (美国Alltech公司) , Millipore-Q型纯水器 (美国Millipore公司) , HH-4型数显恒温水浴锅 (常州国华电器有限公司) 。 白头翁皂苷B3 (白头翁皂苷D) 、白头翁皂苷BD (白头翁皂苷A) 、白头翁皂苷B7 (白头翁皂苷F) 、白头翁皂苷B9 (齐墩果酸3-O-β-D-吡喃葡萄糖基- (1→4) -β-D-吡喃葡萄糖基- (1→3) -α-L-吡喃鼠李糖基- (1→2) -α-L-吡喃阿拉伯糖苷) 、白头翁皂苷B10 (齐墩果酸3-O-β-D吡喃葡萄糖基 (1→3) -α-L-吡喃鼠李糖基- (1→2) -α-L-吡喃阿拉伯糖苷) 、白头翁皂苷B11 (齐墩果酸3-O-α-L-吡喃鼠李糖基- (1→2) -α-L-吡喃阿拉伯糖苷) 对照品 (中药固体制剂制造技术国家工程研究中心自制, 批号均 纯度均≥98%) , 其他试剂均为分析纯。白头翁提取物 (中药固体制剂制造技术国家工程研究中心自制, 批 。 白头翁提取物制备:取干燥的白头翁药材, 10倍量70%乙醇回流提取3次, 每次1 h, 得白头翁总皂苷。将白头翁总皂苷用1.0%Na OH水溶液碱水解反应6 h后放冷过夜, 用盐酸调节p H 7.0, 上D-101大孔树脂柱, 依次用水, 40%乙醇, 75%乙醇, 95%乙醇洗脱;收集75%乙醇洗脱液, 减压浓缩, 真空干燥即得棕褐色粉末状白头翁提取物。 2 方法和结果 2.1 《白头翁提取物》中总羟基甾醇的测定 2.1.1 l量瓶稀释 精密称取白头翁皂苷B3对照品10 mg, 置10 m L量瓶中, 加甲醇稀释至刻度, 摇匀;精密量取上述对照品溶液1 m L置25 m L量瓶中, 加甲醇稀释至刻度, 得每1 m L中含0.04mg的溶液, 摇匀, 即得。 2.1.2 标准溶液的配制 取白头翁提取物15 mg, 精密称定, 置10 m L量瓶中, 加甲醇使溶解并稀释至刻度, 摇匀;精密量取1 m L置25 m L量瓶中, 加甲醇稀释至刻度, 摇匀, 即得。 2.1.3 最大吸收的确定 精密吸取对照品溶液和样品溶液各1.0 m L, 分别置10 m L具塞试管中, 置80℃水浴挥干, 冷却至室温, 加新制的5%香草醛冰醋酸溶液0.2 m L, 高氯酸0.8 m L, 置90℃水浴中加热90 min, 立即置冰水浴中冷却2 min, 加冰醋酸5.0 m L, 摇匀, 以相应试剂为空白, 在200~800 nm扫描, 结果显示, 两者分别在波长为530 nm处有最大吸收。 2.1.4 方法研究 2.1.4. 标准曲线的绘制 精密量取白头翁皂苷B3对照品溶液0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1.0, 1.2, 1.4 m L, 分别置10 m L具塞试管中, 置80℃水浴挥干, 冷却至室温, 加新制的5%香草醛-冰醋酸溶液0.2 m L, 高氯酸0.8 m L, 置90℃水浴中加热90 min, 立即置冰水浴中冷却2 min, 加冰醋酸5.0 m L, 摇匀, 在530 nm处测定吸光度。以白头翁皂苷B3质量浓度X (μg) 为横坐标, 吸光度Y为纵坐标, 绘制标准曲线。方程为Y=0.007 3X+0.040 1 (r=0.999 7) 。结果表明白头翁皂苷B3在10.1~70.4μg呈良好的线性关系。 2.1.4. 仪器精密度试验 精密量取白头翁皂苷B3对照品溶液1 m L, 置10 m L的具塞试管中, 按标准曲线方法连续测定6次, 结果白头翁皂苷B3吸光度的RSD 0.38%, 表明仪器精密度良好。 2.1.4. 重复性的测定 取同一批白头翁提取物样品6份, 按2.1.2项下的方法制备供试品溶液, 按标准曲线方法进行测定, 结果样品溶液吸光