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脊髓空洞前状态中nf-b、ib、vegf、gfap的表达 脊柱空洞综合征是一种常见的缓慢进展性脊柱退行性疾病。空腔前的状态是其疾病的初始状态。为了探讨其发病机制，我们使用免疫组织化学方法，观察了nf-b、ib、vgf和gfp在舌空模型中的发现和作用，并探讨了它们之间的关系。 免疫组化染色 1.动物选择和分组将60只健康、体重1.5～2kg的中国白兔(雌雄不限),随机分为三组,其中Kaolin组30只,生理盐水组和假手术组各15只。 2.造模方法家兔在氯胺酮(30mg/kg)静脉麻醉,取俯卧颏低位,按McLaurm法,用41/2号针头行经皮枕大池穿刺术,缓慢抽出无色透明脑脊液0.6ml后,Kaolin组动物注入37℃25%Kaolin悬浊液0.6ml:依同样方法生理盐水组动物仅注入37℃生理盐水0.6ml;假手术组动物只行枕大池假穿刺,既不注射Kaolin,也不注射生理盐水作为对照。 3.术后观察指标术后密切观察2小时,生命体征平稳后分笼饲养,连续7天肌肉注射抗菌素预防感染并给予营养支持。期间各组均按改良的Tarlov评分法对动物进行行为学检查,评分标准如下:0分,无自主运动:1分,仅限于髋膝关节的非反射性运动;2分,髋膝踝3个主要关节的运动;3分,能主动支持体重和不协调步态,或偶尔出现协调步态;4分,前后肢协调的步态,行走时有趾间关节的运动:5分,正常步态。 4.免疫组织化学检测脊髓组织中的NF-κB、IκB、VEGF、GFAP表达含量 将动物分别在术后第1、3、7、14、21天在氯胺酮静脉麻醉下,行4%多聚甲醛+0.2%戊二醛经左心灌注处死,取出颈髓,置于相同灌注液中4℃下固定48小时。常规石蜡包埋,连续切片,切片厚度6μm。常规免疫组化染色(ABC法)操作,一抗分别应用鼠抗兔NF-κBp56多克隆抗体(Pharmingen),鼠抗IκBα多克隆抗体(SANTA CRUZ),鼠抗兔GFAP多克隆抗体(武汉博士德生物工程公司)阴性对照用PBS代替一抗,其余步骤相同。细胞内有棕黄色粗颗粒分布或棕黄色细腻颗粒分布者为阳性反应。应用HPIAS-1 0 0 0彩色病理图文分析系统测定切片中阳性反应物的面积百分比,数据通过F检验进行统计学处理。 动物观察期间长 1.术后动物神经功能改变所有动物在经枕大池穿刺后2小时麻醉清醒,恢复正常。按Tarlov分级,Kaolin组动物功能障碍随时间延长逐渐加重,生理盐水组和假手术组动物在观察期间则表现正常。 2.脊髓空洞前状态中的NF-KB、lκB、VEGF、GFAP表达含量应用HPIAS-1000彩色病理图文分析系统测定切片中阳性反应物的面积百分比,数据用均数±标准差表示,采用F检验进行统计学分析,NF-κB、IκB、VEGF、GFAP在Kaolin组动物各时间点的表达与在对照组和假手术组动物中的表达间的差异统计结果详见表2。 nf-b信号抑制了vegf在髓炎治疗髓炎中的表达 脊髓空洞症是致残率很高的慢性进展性疾病,发病早期易被忽视,后期缺乏有效的治疗方法,目前在发病机制上也存有争议。空洞前状态(Presyrinx state)是近几年在研究脊髓空洞症发病机制中提出的一个新的概念,我们前期实验显示,脊髓空洞前状态的主要病理变化为脊髓组织的缺血水肿,为了深入探讨这一病理变化的分子生物学基础,我们通过免疫组化的方法观察了其中NF-κB、IκB、GFAP和VEGF的表达变化过程。 NF-κB(Nuclear factor kappa B)是由Sen在1986年首先发现的一种B细胞核因子,由于它可与免疫球蛋白的kappa链基因结合,故而得名。后来发现NF-κB是普遍存在于各种细胞中的转录因子,调控着编码细胞因子、生长因子、细胞粘附分子和一些急性期蛋白的基因,进而参与炎症和免疫反应。 NF-KB在静息情况下位于胞浆内,与κB抑制蛋白(inhibitor KB,IκB)结合成复合物处于失活状态。IκB有多种构型,其中IκBα/MAD3最为重要。细胞受到刺激后,IκBα磷酸化后被降解,从NF-κB/IκBα复合物上解离下来,NF-KB恢复活性,通过核膜上的受体进入细胞核,与靶基因κB位点结合,迅速诱导靶基因的转录。NF-κB调控着诸多参与免疫、炎症反应因子如细胞粘附分子、细胞因子和i NOS等的表达。 本实验结果显示,Kaolin组动物在术后第一天NF-κB的表达即有增高,第三天达到高峰,第七天开始回落,2～3周时基本恢复正常水平。而IκB的活性表达正好与NF-κB的表达呈负相关,第一天开始降低,第三天降到最低点,后逐渐恢复正常。这一结果提示二者之间的抑制性依存关系,与众多文献报道一致。 实验证实,血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor VEGF)可通过抑制内皮