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秦醇提取物体外抑菌的临床研究 秦radixgentiemafa是中国重要的传统中药之一。根据中国的2010年版，它被定义为龙胆科植物秦干旱、早叶秦刺槐、双叉秦海棠、干燥根。其活性成分龙胆苦苷具有抗炎、抗过敏、抑菌等药理作用,但秦艽的提取物的抑菌作用尚未有详细报道。 本实验用秦艽醇提取物对8种细菌进行体外的抑菌研究,选用痢特灵作为对照药物。 1 材料表面 1.1 细菌、培养基、参数设置 金黄色葡萄球菌26003、表皮葡萄球菌26069、粪链球菌32221、大肠杆菌44825、变形杆菌49027、福氏志贺杆菌51579、伤寒杆菌50071、乙型副伤寒杆菌50503(中国药品生物制品检定所)。 1.2 大叶秦macrophyll.干燥根 秦艽(宁夏国大药房,产自宁夏, 经宁夏医科大学药学院王建寰副教授鉴定为龙胆科植物大叶秦艽Gentiana macrophyllaPall. 的干燥根);痢特灵(山西云鹏制药有限公司,批号090901) 1.3 微生物试剂和培养基 人型支原体(MH)液体培养基(杭州天河微生物试剂有限公司,批号080731)、MH琼脂培养基(杭州天河微生物试剂有限公司,批号080810)。使用时按说明配制,121 ℃灭菌30 min备用。 1.4 生物安全柜 DNP-9272电热恒温培养箱(上海精宏实验设备有限公司);BHC-1300IIA/B3生物安全柜(苏州安泰空气技术有限公司);微量移液器(上海热电仪器有限公司);YXQ-LS-5OA高压灭菌锅(上海博讯实业有限公司医疗设备厂)。 2 方法和结果 2.1 供试品原液及溶液制备 称取秦艽干燥根(切碎)100 g置于圆底烧瓶中,加入 500 mL 50%乙醇浸泡12 h,80 ℃水浴锅中热回流4 h,抽滤,滤液蒸馏法浓缩至100 mL,即得供试品原液(每1 mL药液相当于1 g秦艽生药),置于4 ℃冰箱中备用。 精密称取痢特灵5 mg于50 mL量瓶中,用纯化水定容至50 mL,即得痢特灵质量浓度为0.1 g·L-1对照液,置于冰箱中备用。 2.2 u3000酸、碱、乳、颗粒的稀释3.4% 取已分纯的各菌株接种于MH液体培养基,经37 ℃培养18～24 h后,用灭菌生理盐水稀释至107～108CFU·mL-1(菌落形成单位),备用。 2.3 药物浓度检测 采用试管二倍稀释法联合琼脂平板法。每个菌种的抑菌试验取灭菌试管2排,每排7管,各管分别加入2 mL MH液体培养基,然后于每排的第1管分别加秦艽醇提物药液、痢特灵药液2 mL,混匀后取2 mL加入第2支试管中。然后依次取出2 mL移入下一管,到第5管时弃去2 mL,稀释倍数分别为1∶2,1∶4,1∶8,1∶16,1∶32,药物浓度依次为:500/0.05,250/0.025,125/0.012 5,62.5/0.006 25,31.3/0.003 13 g·L-1,每管加相应受试标准菌液各50 μL,充分混匀。每排第6管为无菌阴性对照管,即2 mL MH液体培养基加2 mL药液。每排第7管为无药阳性对照管,即2 mL MH液体培养基加50 μL标准菌液。置37 ℃培养箱培养18～24 h。 因为中药液本身的色泽浑浊和人视觉的差异,需采用琼脂平板法观察结果。因此,再从每一管中取培养物10 μL,转种到相应的琼脂平板培养基上,每个试管转接3个平板。用接种环涂布,置37 ℃培养箱培养18～24 h。 观察记录试管及培养皿中细菌生长情况,以不生长菌落的最高药物稀释浓度为该药物对该种细菌的最小抑菌浓度(MIC)。 平行进行3次试验,以3次结果相同为准,平板菌落数以3个平行平板的平均值计算。 2.4 最低抑菌浓度mic测定 不同浓度的秦艽醇提取物和痢特灵对8种细菌的抑菌结果见表1。 结果可知,阴性对照组液体培养基和平板均无菌生长,阳性对照组经染色后于显微镜下观察各菌种均生长良好且无杂菌生长,表明实验结果有效。秦艽醇提物、痢特灵对8种细菌的最低抑菌浓度(MIC)见表2。 用秦艽醇提取物、痢特灵分别对8种细菌进行体外抑菌实验,测得秦艽醇提取物对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、粪链球菌抑制作用较强;对变形杆菌、福氏志贺杆菌、伤寒杆菌、乙型副伤寒杆菌有抑制作用;对大肠杆菌的抑制作用较差。痢特灵对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大肠杆菌、粪链球菌、变形杆菌抑制作用较好;对福氏致贺杆菌、伤寒杆菌、乙型副伤寒杆菌抑制作用较差。 3 秦醇提取物的抑菌效果 秦艽又名西秦艽、大秦艽等,为我国传统中药材,主产甘肃、宁夏、陕西等地,历代本草均有记载。秦艽的活性成分龙胆苦苷具有抗炎镇痛、抑菌等药理作用。本实验研究了秦艽醇提取物对8种细菌的体外抑菌作用,为秦艽开发和应用指导临床用药提供了一定的实验依据。 由于中草药存在提取液颜色较深或浑浊现象,抑菌结果观察困