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酒精性肝病模型的建立及评价 随着酒精消费的增加，酒精对人体的影响，尤其是肝脏毒性的影响，引起了人们的关注。长期饮酒可引起酒精性肝病, 包括脂肪肝、酒精性肝炎、肝纤维化、肝硬化和肝癌等。 酒精性肝病是临床治疗中的棘手病症, 有诸多的问题令临床医生迄今尚无法解决, 如酒精性肝病发生后的恢复性逆转问题, 酒精性肝病在发生过程中的药物防治问题等。“酒精肝”是导致人类发生肝纤维化的主要病因, 目前对酒精性肝病发病机制的了解很大程度上取决于动物模型的可靠性和可重复性, 以及模型与人类酒精性肝病的相似性。为了深入研究酒精性肝病的发病机制, 筛选防治酒精性肝病的有效药物, 寻找一种理想的实验动物模型是十分必要的。 1 化学成分检查 小鼠或大鼠以50～60度白酒或体积分数为50%-60%的乙醇一次性经口灌胃4.0～6.0g/kg, 4～24h内处死动物, 检查肝功、肝组织的病理变化及脂质过氧化等有关指标。 建立急性酒精性肝损伤动物模型采用大鼠、小鼠均可, 一般采取灌胃的方法, 造模时间一般不长, 根据测定指标而定。急性酒精性肝损伤模型以肝及血中的某些化学指标改变为其主要特征, 如肝组织MDA显著增加, 血清甘油三脂 (TG) 明显升高等, 而血清转氨酶和肝组织结构病变却不明显。 2 慢性酒精性肝损伤的动物模型 2.1 大鼠的酒精行为 1963年Liber和Decarli等开创了通过液体食料饲喂酒精的方法, 后来又对食料配方进行了改进。该食料的热量构成比为蛋白质18%、脂肪35%、糖类47% (47%中的36%的热量由酒精代替) , 并含有一些无机盐等。大鼠除了饲喂含酒精的液体食料外, 不再给予任何食物或液体, 其酒精的摄入量达12～18g/ (kg.d) 。配对喂养同窝大鼠该液体食料4周出现明显的肝脂肪变性, 但未出现酒精性肝损伤及肝纤维化。此模型由于其简便易行、费用低、形成率高及稳定性好而受到青睐, 但由于大鼠厌酒, 故而不能保证大鼠较恒定的酒精摄人量。为克服大鼠厌酒习性, Liber将实验动物改为狒狒, 液体食料并做适当调整, 实验6个月可出现肝小叶中央静脉周围纤维化, 2～3年后, 1/3的动物发生肝硬化。该模型与人类酒精性肝硬化极其相似, 但由于动物来源有限, 价格昂贵, 造模周期长, 难以推广应用。 2.2 酒精代谢模型 1984年Tsukamato-French等给大鼠手术置入胃管, 持续注入含乙醇的液体食料, 酒精可占总热量的47%, 从而能维持血中一定的酒精浓度, 实验重复率高。该造模方法在研究体内酒精代谢机制中得到了广泛应用, 但制作该模型需要一些技术上的训练, 如胃管置入、维持, 以及保证24h持续注入酒精所需的设备, 价格昂贵, 给研究者带来不便。难以在国内推广。 2.3 酒精性肝损伤模型的建立 李舒丹等采用红星牌二锅头平均以1.5ml/100g的剂量每日早晨灌胃一次, 分别于4、8、12周后取8只大鼠以股动脉放血法处死观察, 结果显示肝组织可见红色胶原纤维增生, 肝细胞有不同程度的脂肪变性。 范建高等在高脂饮食的基础上, 采用60%的酒精灌胃, 每天2次, 成功地建立了酒精性肝损伤模型。李东良等在标准饲料的基础上, 以50%酒精10ml/kg灌胃, 每天2次, 同时以10%的酒精为唯一饮料, 结果造模14周出现肝细胞脂肪变及酒精性肝炎样改变, 部分实验动物可见肝脏间质反应性增生。 冯志强等采用高浓度酒每日灌胃, 同时改进饲料配方, 增强食物中脂肪含量、增加铁剂的方法。结果造模2w后可见肝脏轻微脂肪沉积, 3w后中度脂肪肝, 4w后重度脂肪肝病变, 与对照组相比, 肝指数明显增大。 2.4 肝组织中乙醛加合物 Yokoyama等给豚鼠腹腔注入血红蛋白-乙醛加合物后, 以15%酒精为唯一饮料, 喂养40天后出现肝细胞坏死伴炎细胞浸润, 延长至90天时出现肝小叶的门静脉周围及中央静脉周围重度纤维化, 伴单细胞浸润及个别肝细胞周围有纤维组织伸入, 且在肝纤维化部位可检测到乙醛加合物。 3 酒精性肝损伤的模型建立 随着科学技术的发展, 国内外越来越多的研究人员采用基因敲除技术等来研究酒精性肝病的机制, 如Hiroshi kono等用基因 (ICAM-1) 敲除小鼠进行实验, 并给予该小鼠饲含酒精的液体食料, 从而研究ICAM-1在早期酒精性肝损伤小鼠中的作用。 总之, 酒精是导致人类肝损伤的重要原因, 需要建立一些动物模型来研究酒精性肝病的发病机制, 并探讨其防治措施。人类的酒精性肝损伤从肝细胞的脂肪变性、肝脏炎症损伤至肝纤维化、肝硬化的形成时间比任何一种动物模型都要长, 而且人类和各种动物对酒精的代谢不完全相同, 对肝损害的愈合反应也各不相同, 因此没有一种模型能准确地重演人类酒精性肝损伤的过程。当前体外分离各种肝细胞群联合培