醋酸布舍瑞林纳米粒的制备及体外释药研究.docxVIP

醋酸布舍瑞林纳米粒的制备及体外释药研究 乙酸布什罗林是一种合成脑损伤的自然促性腺激素释放激素（gnrhlh）。这是一种亲水药物。皮下注射后，它完全吸收，并集中在肝脏、肾脏和垂体的前叶。生物半衰期为80分钟，可促进分泌激素、分泌卵细胞和激素分泌。临床用于前列腺癌、子宫内膜异位症及不孕症的治疗,使用时需多次注射给药,存在使用不便以及患者依从性不好等问题。为了延长BA在体内的循环作用时间,提高其生物利用度,减少给药次数,提高患者用药的依从性,本文选择聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)为缓释纳米粒的载体材料,采用复乳法制备了醋酸布舍瑞林纳米粒(BA-NP)皮下注射缓释给药系统,为多肽类缓释注射给药系统奠定基础。 1 高效液相色谱法测定样品 BP211D型电子天平(德国Sartorius公司);UD-201型超声细胞破碎仪(日本Tomy公司);5417R型高速冷冻离心机(德国Eppendorf公司);R-205旋转蒸发仪(瑞士Buchi公司);冷冻干燥机(德国Savang公司);3531型离心机(美国Abbott公司);1100型高效液相色谱(HPLC)仪(美国Agilent公司)。 BA对照品(自制,系从原料药精制而成,HPLC法测得纯度:99.6%);BA原料药(深圳市翰宇药业有限公司,批号纯度:98%);PLGA(分子量比:75∶25,山东省医疗器械研究所,批号分子量:30 000);泊洛沙姆188(F68,上海协泰化工有限公司);聚乙烯醇(PVA,日本可乐丽公司);甲醇、乙腈(均为色谱级,美国迪马科技有限公司);BA-NP(自制,批号:081005、081006、081007,含量:(1.03±0.09)%);其它试剂均为分析纯。 2 方法和结果 2.1 有机溶剂配制 将处方量的BA原料药溶解于p H 6.0的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲溶液中作为内水相(BA浓度为0.5 mg·m L-1);PLGA溶于乙酸乙酯∶乙腈(9∶1)的混合有机溶剂中,使成浓度为2%的PLGA溶液,作为中油相;按1∶10的体积比将内水相加入中油相中,于4℃水浴条件下,以40 W的超声功率间歇超声乳化10 s×5次成初乳(W/O);以F68作为乳化剂,制备成浓度为0.5%的溶液为外水相;将外水相加入到初乳中,初乳-外水相体积比=1∶8,于4℃水浴条件下,以40 W的超声功率间歇超声乳化10 s×2次成复乳(W/O/W),恒温37℃,120 r·min-1旋转蒸发30 min除去有机溶剂,得到泛蓝色乳光的BA-NP混悬溶液,冷冻干燥成BA-NP冻干粉末。 2.2 粒径分布参数 用2%磷钨酸负染,室温干燥至形成薄膜后,置于透射电镜(TEM)下观察其表观形态并照相,激光粒度仪测定其平均粒径和粒径分布参数。结果表明,纳米粒形态圆整,大小较均匀,粒径呈单峰分布,平均粒径127~132 nm,粒径分布指数(PDI)值0.127~0.193,Zeta电位-64.8~-67.3 m V,透射电镜照片见图1。 2.3 ba-草甸中的ba含量测定 2.3.1 紫外检测光谱 精密称取BA对照品1 mg,溶于50mL甲醇溶液中使成浓度为20μg·mL-1的溶液,取4 mL于10mL容量瓶中以甲醇稀释定容成8μg·m L-1的对照品溶液,进样,以紫外检测器进行光谱扫描。结果表明,在200~400 nm波长范围内,BA于220 nm波长处有最大吸收,故选择该波长为检测波长,紫外吸收光谱如图2所示。 2.3.2 流动相、流速和检测波长 色谱柱:Diamosil C18(150 mm×4.6 mm,5μm);流动相:0.04%三氟乙酸-乙腈(72∶28);柱温:30℃;流速:0.8 mL·min-1;检测波长:220 nm;进样体积:10μL。 2.3.3 空白辅料对药物测定的影响 称取处方量的PLGA、F68等辅料,制备空白PLGA-NP(空白对照)和BA-NP(供试品),超速冷冻离心(4℃,25 000 r·min-1,60 min),分别精密吸取1 mL空白PLGA-NP和BA-NP离心后的上清液,加乙腈适量,超声5min后,以溶剂水-乙腈(72∶28)定容至10 mL,离心(13 000 r·min-1,5 min),考察空白辅料对药物测定的影响。 空白PLGA-NP、BA-NP及BA对照品在“2.3.2”项下色谱条件下,BA能够较好地分离,且峰形良好,保留时间适中(5.148 min),PLGA、F68等辅料对BA测定无干扰,色谱见图3。 2.3.4 标准曲线及线性回归 精密称取1 mg BA对照品,以甲醇制备成100μg·mL-1的标准品母液,分别吸取一定体积的母液,以乙腈-水(28∶72)为溶剂稀释成8、4、2、1、0.5、0.2、