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分子生物学技术在病虫害防治中的应用 随着世界气候变化和化学农药的广泛使用，害虫的发生和危害日益严重。这已成为影响我国农业和工业生产的重要问题之一。我们需要加强基础研究和高科技考察。分子生物学技术诞生于20世纪70年代, 在许多领域已经取得了突破性进展, 而且仍在突飞猛进的发展, 为生物学、农业、医学带来了革命性的变革, 并已结出了累累硕果。病虫害防治也不例外, 分子生物学已经成为其各个方面的重要技术支撑, 正在开辟病虫害防治的新途径, 并且显现了极好的发展势头, 利用生物技术来控制害虫的新思路、新设想, 已经开始在生产实践中得到应用。 1 rapd的扩增 化学农药由于其具有快速、高效、经济的显著特点, 从开始应用之日起就成为害虫防治的主要手段, 但随着化学农药的大量长时间使用, 昆虫对农药的抗性骤增, 用药量不断加大, 造成经济、环境、社会等方面的压力不断增加。研究昆虫抗药性机理, 解决抗性问题已成为一个重要的课题。分子生物学技术的发展提供了一个极好的研究工具。通过近年来在分子水平对抗性基因的许多研究, 目前对抗性机理的分子基础已逐渐有所了解。在一些方面取得了丰富的研究成果, 例如:芮昌辉等 (1996) 利用RAPD技术分析了棉铃虫对三氟氯氰菊酯抗性的遗传方式, 通过筛选出的3个随机引物在R和S两亲本之间共扩增出47条DNA带, 其中差异带达27条;初步筛选出与抗三氟氯氰菊酯有关的RAPD分子标记3个, 即OKG4-1300、OPG6-1450、OPG8-535, 它们能同时出现于R亲本和正反交F1代中, 而在S亲本中不出现, 与抗药性遗传方式的测定结果一致, 证明了这种方法的可靠性。Raymond (1991)用此技术研究了库蚊 (Culexpipiens) 对有效磷农药抗性产生和扩散的机制, 证明导致库蚊抗性产生的酯酶B2基因的扩散具有单一起源, 并通过迁飞扩散到不同地区。在许多情况下, 抗性的产生是由于昆虫对杀虫剂的代谢能力提高。代谢杀虫剂的解毒酶一般使有毒的外来化合物经过氧化、还原或水解后, 其产物的水溶性增高, 使它们更容易从昆虫体内排出。解毒酶包括细胞色素P450氧化酶系、水解酶 (酯酶) 及谷胱甘肽s-转移酶。目前对酯酶分子结构和基因结构已经弄清, 对其酯酶基因的扩增机制已有了深入了解。不同类农药的靶标受体基因均已进行克隆, 如钠离子通道基因, 目前已利用高等动物钠离子通道基因作探针, 分离到了昆虫中钠通道基因。另外还有GABA受体复合体、乙酰胆碱各型受体基因、乙酰胆碱酯酶基因、激素受体、Bt受体等。昆虫细胞色素P450的研究也深入到分子水平。P450活性提高在许多杀虫剂抗性中具有重要作用, 然而与P450相关的抗性分子基础了解的尚少。随着对P450分子基础的深入研究, 将会以本质上阐明昆虫P450与抗药性的关系, 并深层次揭示昆虫生理生化及其与环境的适应性之间的联系。 2 微生物农药产品的开发 微生物农药具有对环境和生态安全的特点, 因而对其的研究与应用受到世界各国的高度重视。分子生物学技术的出现为菌株的遗传改良提供了有效的手段, 开发新的生物农药防治病虫害, 现已步入一个崭新的阶段, 新一代杀虫防病重组微生物的研究开发已取得显著的进展。从新型生物农药的研制、应用技术到效能评价都已利用了分子生物学手段, 最突出的是重组病毒和利用遗传工程技术修饰微生物杀虫剂的研究, 及利用基因工程技术提高生物农药固有活性和克服不利的环境因子、扩展寄主范围的研究等。1991年以来, 国外已有一些新型的微生物农药产品投入市场。其中以微生物杀虫剂居多, 如采用质粒修饰与交换技术开发的新型Bt杀虫剂Foil、Condor和Cutlass;利用基因体外重组技术开发的新型Bt杀虫剂Raven OF和Crymax WDG;利用基因转移与生物微囊技术开发的杀虫荧光假单胞菌菌剂MVP、M-Trak和M-Peril等。美国EPA已经审查了50个新的工程菌。例如, 对多种植物根癌病有效的放射土壤杆菌K84菌株经基因缺失重组后, 防病效果更为稳定持久, 1992年已定名为Nogall获准进入国际市场。昆虫病毒作为生物杀虫剂具有特异和安全等优点, 但由于有作用缓慢和寄主太窄等弱点而在应用上受到一定限制。如果昆虫病毒在感染昆虫的同时表达具有杀虫活性的毒素、干扰昆虫正常代谢的激素或酶, 这样可以发挥二者优势, 因而重组病毒研究进展非常快, 其中以苜蓿夜蛾的AcNPV 和家蚕BmNPV 使用最广泛。科学家已经用具有杀虫和干扰代谢作用的基因成功地构建了可以表达δ-肉毒素、蝎毒 (AaHIT) 、抑制昆虫蜕皮的蜕皮甾醇糖化转移酶、利尿激素、JH酯酶、几丁质酶等新的工程病毒。 3 抗菌剂、抗虫基因与烟草复育剂的应用 从1983年, 世界第一例转基因植物 (Gen