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影响转基因植物表型变异的因素分析

随着植物外源基因转化的快速发展，转世技术在植物生物学基础和应用研究领域得到了广泛应用。转基因技术为改良植物抵抗生物和非生物胁迫，创育能生产药物、优质营养品和其他高附加值的生物产品的转基因植物提供了新途径。目前，全世界转基因植物的种植面积已达5千多万公顷，不同领域的研究人员根据不同的需要致力于培育不同种类的转基因植物品种。尽管转基因方法看起来简单、直接、具有吸引力，但由于多种不可控制或不可预测因素的影响，很难对转基因实验结果进行准确分析。

研究发现，在相同的条件下，用同样的转化方法转化同一种外源基因，所获得的转基因植株间不仅外源基因表达水平差异很大，而且由于转基因的间接作用还可能使转基因植物出现额外的表型变异。例如，高水平表达雪花莲凝集素的转基因水稻植株，呈现不育和发育受阻。亦有报道表明许多转基因植株表型变异的性状与导入基因无显著相关性。例如，抗病转基因水稻植株与非转基因植株相比明显矮小，开花迟，部分不育。Liu等人发现，在大豆上，转基因植株形态异常的花不能产生种子。同样，转基因黄瓜自交授粉可以形成果实，但不产生种子。在这种情况下，就必须鉴定转基因植物的表型差异是否仅仅由转入的基因所产生，以区分转基因效应和其他因素的影响。

因为不同学科的科研人员都在应用转基因技术进行研究，需要对处理和分析转基因植物及其后代的有关问题进行详细解释，并对可能影响转基因植物表现的复杂交互作用进行讨论。大多数文献介绍的分析转基因植物的方法比较简单，对于进一步分析和解释转基因结果没有详细的论述。本文重点阐述影响转基因植物变异的因素，提出转基因植物遗传分析和选育良好实验品系的技术途径，以便使研究者能从对转基因植物及其后代的分析中得出更可靠和更有价值的结论。

1植物突变的原因

一般引起转基因植物表型变异的原因主要有两个：转基因方法和转基因品系选育过程中的其他因素。

1.1影响基因重排的因素

影响转基因植物表型变异的一个主要因子是转基因方法。常用的转基因方法有4种：(1)农杆菌介导法；(2)生物微弹导入DNA法（即基因枪法）；(3)电击法；(4)原生质体聚乙烯乙二醇（PEG）介导DNA法。除质体转化外，目前还没有一种方法能将外源DNA整合在特定的基因座上，同样也不能对导入基因的拷贝数进行控制，其结果是外源DNA在目标染色体上随意插入。携带相同外源基因序列的转基因植物，随外源基因在受体基因组中插入位置的不同而表型不同（即转基因的位置效应）。因为目前的选择体系是根据与目的基因相连的选择标记基因在受体中表达与否进行筛选的，所以如果转基因在异染色质区段插入，其表达就受到抑制，而且这样的转化细胞很难被选择。如果转入的基因碰巧在强化因子附近区域插入，那么转基因表达水平将会大大提高；如亚端粒区域的基因表达水平高，插入在这一区域的外源基因可能表现出正向位置效应。

植物转化中，外源基因插入拷贝数的不同也会引起转基因植株表型变异。不同植物种属的转基因实验表明，转基因植物含有一个或多个插入位点，而一个插入位点又含有多个转基因拷贝。此外，转基因结构变化也会引起表型变异。多数情况下，携带目的基因序列的质粒载体序列随目的基因一起导入受体基因组中。即使农杆菌介导体系的T-DNA整入受体基因组机制较精确，这一现象在其转化系中也有发生。已经报道的转基因结构变化包括转基因断裂、倒置、缺失以及其他复杂的重排。在生物微弹介导DNA转化法获得的转基因植物中，转基因的重排情况普遍存在，原因可能是传送DNA的物理力量所引起的。上述的这些因素，通过单独或相互作用对转基因植物的表型和转基因的遗传产生影响，使人很难区分转基因本身的效应与相伴发生的不可控制因子的效应。

近几年，基因沉默导致的转基因低表达或不表达的现象已经引起人们的极大关注，并发现基因沉默与多个插入位点、DNA重排、位置效应以及过量表达等相关。此外，转导基因与受体基因序列之间的相似性可能是产生共抑制的一个重要原因。所以，有必要培育大量转基因植物和转基因品系，其数目不是几个，而是十几个甚至更多，以此来分析转基因的真正效应，剔除与之相关或不相关的其他效应。此外，选择单拷贝的转基因植物进行研究，可以使分析方法得到简化。

1.2遗传组成和表型变异组成

多数情况下，用当代转基因植株（T0）或自交后代（T1）进行分析研究。T1会发生转基因分离，从而引起表型变异。T0和T1代转基因植物的表型由各种不同的因素决定（表1）。异花授粉植物自交可能引起近亲衰减，而且转基因的插入如果破坏了功能基因的结构或表达，该功能基因座所控制的性状在纯合转基因植株中将会出现突变表型，但在T1代转基因植株中却可以消除嵌合表型或组织培养所产生的生理效应的影响。对于无性繁殖植物，转基因以半合子的形式存在，在当代转基因植株和它们的无性派生系中，可能出现