反相高效液相色谱法测定血清中的游离氨基酸_边春香.pdf

2005年5月色谱Vol.23No.3

May2005ChineseJournalofChromatography317

反相高效液相色谱法测定血清中的游离氨基酸

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边春香,孙志红,李莉,金伟

(1.大连市第六人民医,辽宁大连116001；2.大连医科大学组织胚胎学教研室,辽宁大连116023)

关键词：反相高效液相色谱法；游离氨基酸；人血清

中分类号：O658文献标识码：B文章编号：1000-8713(2005)03-0317-01

肝脏是氨基酸(支链氨基酸除外)新陈代谢的重要器官,

而且对维持氨基酸代谢的平衡起重要的作用。当肝细胞严

重损害时就会引起氨基酸代谢障碍和紊乱,使氨基酸之间比

例失调,尤其明显地是支链氨基酸与芳香族氨基酸比值发生

改变。根据该比值的改变情况既可预测肝性脑病,又可判断

肝脏疾病的严重程度,而且氨基酸的测定对许多疾病的诊断

及治疗均具有重要的价值,因此在临床上开展血清中游离氨

基酸的检测具有重要意义。本实验室采用反相高效液相色

谱法对血清中游离氨基酸进行测定,方法稳定、成本低,在临

1人体血清中游离氨基酸的分离谱

床应用中获得了满意结果,所分离出的游离氨基酸Orn、Cys1.Asp；2.Glu；3.Ser；4.DNP-OH(FDNB的水解产物)；5.

和Tyr对临床某些疾病的诊断有一定参考价值。Gly；6.Thr；7.Arg；8.Pro；9.Ala；10.Cys；11.Hs；12.Met；

1实验部分13.Val；14.Trp；15.Orn；16.Phe；17.Ile；18.Leu；19.Lys；

20.Tyr.

1.1仪器与试剂

LC-10ATvp高效液相色谱仪(岛津公司,日本),CLASS-2.3血清中游离氨基酸的测定

VP色谱软件(3.0)。1-氟-2,4-二硝基苯(FDNB)(分析纯,2.3.1线性范围将19种氨基酸标准液均稀释成10,50,

Merck公司)；-氨基酸标准品(光谱纯,Sgma公司)；0.5L100,300,500和700μmol/L系列浓度,测定相应峰面积后进

mol/L碳酸氢钠缓冲液(pH9.0)、0.01mol/L磷酸氢二钾行线性回归,线性范围为10～700μmol/L,相关系数为

缓冲液(pH7.0)(自配)、甲醇(色谱纯)。0.970～0.998。

1.2标本采集与处理方法2.3.2精密度取一份正常人血清标本,分别做批内(n=

取空腹不抗凝血2mL,离心后取血清200μL,加入20015)和批间(n=6)相对标准偏差(RSD)测定,按峰面积计算,

μL乙腈振荡混合,静置片刻后取上清液(或氨基酸标准液)批内RSD为2.8%～9.9%,批间RSD为3.2%～10.1%。

200μL,加入上述碳酸氢钠缓冲液及含1%(体积分数)FD-2.3.3回收率将血清去蛋白后再将经准确称量的氨基酸

NB的乙腈溶液各50μL混匀,置于50℃水浴40mn后再标准品加入样品中,测得平均加标回收率为95%～102%。

加入上述磷酸氢二钾缓冲液100μL,混匀,取3μL进样。2.3.4样品测定任选30名健康志愿者测定血清中游离

1.3色谱条件