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病理免疫组化染色失败应急演练脚本

【演练场景】某三甲医院病理科免疫组化实验室，上午9时15分，技术员正在进行一批肺癌根治术标本的免疫组化染色，共32片切片，包含EGFR、ALK、PD-L1等7项伴随诊断指标，其中12片为临床加急标本（需当日出具结果指导下午的多学科会诊）。

9时20分，技术员小张在完成DAB显色步骤后，发现所有切片均未出现预期染色信号：阳性对照片（已知肺腺癌EGFR阳性标本）细胞质无棕黄色着色，阴性对照片无非特异性染色，但待测标本的目标位点也完全无着色，整张切片呈“白纸状”。小张立即停止后续脱水封片步骤，保留当前水洗后的湿片状态，并第一时间向免疫组化组组长李老师汇报。

【演练角色】

1.李组长：免疫组化组负责人，5年免疫组化技术管理经验，熟悉染色全流程质控与故障排查。

2.小张：一线技术员，3年工作经验，负责本次染色操作。

3.王技术员：组内资深技术员，4年工作经验，擅长试剂效价验证与仪器校准。

4.张主任：病理科副主任，分管技术平台，负责应急事件的决策与外部协调。

5.临床联络员小吴：病理科与临床科室对接专员，负责向临床反馈进度、解释情况。

6.试剂厂家工程师陈工：免疫组化试剂合作厂家驻场技术支持，熟悉试剂配方与常见故障。

【演练流程与细节】

第一阶段：故障识别与初步响应（9:20-9:30）

9:20小张：“李组长，紧急情况！今天这批肺癌标本的免疫组化染色，DAB显色后所有切片都没着色，阳性对照也完全没信号，您快过来看一下！”

李组长立即放下手头工作，走到染色操作台：“先别急，把刚才的操作流程再捋一遍：烤片温度和时间？脱蜡脱苯的试剂更换时间？抗原修复的条件？一抗孵育的温度和时长？DAB试剂是刚开的吗？”

小张一边拿出操作记录册，一边回忆：“烤片是65℃烤了90分钟，昨天刚换的新脱蜡液和无水乙醇，抗原修复用的是EDTA缓冲液（pH9.0），高压修复12分钟，从安全阀冒气开始计时的。一抗是按照试剂说明书1:100稀释的，用的是自动免疫组化仪的37℃孵育60分钟程序，DAB是上周开的试剂，一直在4℃冰箱保存，今天拿出来恢复室温15分钟后才用的，滴加时确认试剂没有沉淀。”

李组长走到染色架前，取过阳性对照片，放在显微镜下低倍镜观察：“切片脱蜡彻底，细胞核苏木素复染（临时复染确认）清晰，说明前处理到脱水前的步骤没问题，问题应该出在抗原修复之后的抗体结合、显色环节。小张，你马上把今天的操作记录详细整理出来，包括每一步的仪器参数、试剂批号、操作时间点；另外，把同一批次处理的HE染色片拿过来，确认组织固定是否合格——如果HE切片的细胞核浆界限清晰，说明标本固定没问题，排除组织自溶导致抗原破坏的可能。”

9:25小张取来同批次HE切片，李组长镜下观察后：“HE切片显示组织固定良好，细胞核染色均匀，浆质分界清晰，排除标本前处理的问题。现在立即启动免疫组化应急预案：第一，所有湿片继续用PBS缓冲液浸泡，避免干燥；第二，王技术员，你马上准备备用的一抗、二抗、DAB试剂，以及另一批次的阳性对照切片（已知ALK阳性的肺癌标本）；第三，我现在向张主任汇报情况，申请启动应急检测流程。”

9:28李组长拨通张主任电话：“张主任，我是免疫组化组李组长，今天上午一批32片肺癌标本（含12片加急）免疫组化染色全部失败，阳性对照无信号，初步排除标本固定和前处理脱蜡问题，怀疑是抗体或显色系统故障，申请启动科内免疫组化应急预案，同时需要厂家工程师协助排查，是否可以？”

张主任：“同意启动预案，你先牵头排查核心原因，我马上到实验室协调资源，同时让临床联络员小吴准备对接临床，先不要直接说‘失败’，而是告知‘染色过程中发现质控异常，正在紧急排查，会尽快给出解决方案’，避免引发临床恐慌。另外，加急标本涉及下午的MDT，必须优先处理，确保16:00前能出结果。”

9:30李组长：“小张，你现在联系临床联络员小吴，把标本情况（数量、加急类型、涉及的临床科室）整理好，由小吴统一对接；王技术员，你负责准备备用试剂和阳性对照，我们先做快速排查实验，同时我联系厂家陈工，让他10分钟内到实验室。”

第二阶段：故障排查与原因定位（9:30-10:30）

9:35厂家工程师陈工抵达实验室，李组长介绍情况后，陈工：“首先，我们可以分三个维度排查：抗原修复是否有效、一抗结合是否正常、二抗与显色系统是否故障。先做一个‘分段验证实验’。”

王技术员已经准备好3片已知阳性的对照切片（分别对应EGFR、ALK、PD-L1），按照以下方案同步操作：

验证实验1：抗原修复有效性验证

取1片EGFR阳性对照片，直接跳过脱蜡烤片步骤（模拟已完成前处理的标本），用PBS冲洗后，滴加EGFR一抗（备用批次），37℃孵育30分钟，然后按照标准流程加二抗、DAB显色。同时，取另