复合成骨蛋白-1多肽水凝胶缓释系统对小鼠成骨细胞碱性磷酸酶、骨钙素和核心结合因子α1表达的影响.pdf

细胞生物学杂志 ChineseJournalofCellBiology2009，31(5)：677—682 http：／／www．cjcb．org 复合成骨蛋白．1多肽水凝胶缓释系统对小鼠 成骨细胞碱性磷酸酶、骨钙素和 核心结合因子 1表达的影响 胡飞琴 ， 谢志坚 张 锋 (浙江大学医学院附属 口腔医院，杭州 310006；宁波天一职业技术学院，宁波 315104) 摘要 研究复合成骨蛋 白一l(osteogenicprotein一1，OP．1)多肽水凝胶缓释系统对小鼠成骨 细胞碱性磷酸酶(alkalinephosphatase，ALP)、骨钙素(osteocalcin，oc)和核心结合因子0c1(corebinding factor仅1，Cbfod)表达的影响。实验分OP．1组、OP一1／水凝胶组和对照组，对小鼠成骨细胞培养 ld、4d、7d、10d、14d后，运用免疫细胞化学方法分别检测各组各时间点ALP、Oc和Cbfod 的表达 结果显示培养4d、7d、10d、14d，OP．1组和OP一1／水凝胶组ALP、oC、Cbfod阳性表 达均比对照组多(PO．05)，培养4d、7d、10d，OP一1／水凝胶组ALP、oC、Cbfcxl阳性表达均较 OP—l组少(尸O．05)；OP一1组培养 ld，Cbf~l开始有表达，而其他组、其他指标在 1d均无表达； OP—l组培养7d，ALP和Cbfod表达量达顶峰，而OP．1／水凝胶组培养 10d才达顶峰：到 14dOP．1 组和OP一1／水凝胶组ALP、Cbfod的表达无显著性差异(P0．05)。研究表明复合OP一1多肽水凝胶 缓释系统能缓陵释放OP—l，促进成骨细胞分化，增加ALP、OC和Cbfod的表达。 关键词 成骨蛋白一1；多肽水凝胶缓释系统；碱性磷酸酶；骨钙素；核心结合因子 0c1 应用生长因子缓释系统可以有效促进成骨、缩 l材料与方法 短疗程，这是当今医学领域和生物材料领域的研究热 1．1材料 点。成骨蛋白．1(osteogenicprotein一1，OP．1)即骨形 rhOP一1购 白美国PeproTech公司；RADA16多肽 态发生蛋 白7(bonemorphogeneticprotein7，BMP7)， 购 自上海波泰生物科技有限公司；小鼠成骨细胞株 是BMP家族 中一员。最早是由Ozkaynak等 【]在 1990 (mouseosteoblast—likecells，MC3T3一E1)由中科院上海 年从牛成骨蛋 白提取物 中分离出来的一种新的蛋 白 生命科学研究院细胞库提供；胎牛血清、0c—MEM培 质 。OP．1是一种具有强大骨诱导活性的成骨因子， 养液为Gibco公司产品；胰蛋白酶为吉诺生物医药技 能促进成骨细胞增殖和分化 。但是没有合适的缓释 术公司产品：ALP、OC、Cbfctl多克隆抗体、免疫 系统，OP一1在体内很快就被分解、稀释，很难在体 细胞化学ABC检测试剂盒、DAB显色试剂盒为武汉 内长时间保持有效浓度，与载体材料结合可持续保持 博士德生物工程有限公司产品。 其生物活性，并控制其释放速率和有效浓度 。 白组 1．2 实验分组 装多肽水凝胶 由于具有完美的生物相容性和极高的 实验分为3组，即OP一1组、OP一1／水凝胶组和 水含量，能够保持药物的生物活性，是近年在该领域 对照组。OP一1组在细胞接种后培养液中加入rhOP一 一 个新的发展方向。本实验用 RADA16(RADARA— 1：OP．1／水凝胶组是将细胞接种在水凝胶缓释系统环 DARADARADA)多肽水凝胶与重组人成骨蛋 白．1 境中，但细胞与水凝胶缓释系统不直接接触；对照组 (rhOP一1)复合形成缓释系统，观察其对小鼠成骨细胞 则不采用任何干预措施 。 碱性磷酸酶(alkalinephosphatase，ALP)、骨钙素 (osteocalcin，0C)和核心结合因子 l(corebinding