大孔树脂分离纯化翻白草中总黄酮优化工艺研究.pdfVIP

维普资讯 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2008VOL．19NO．6 时珍国医国药2008年第 19卷第6期 大孔树脂分离纯化翻 白草中总黄酮优化工艺研究 李胜华，伍贤进 ，刘惠君 (怀化学院，湖南 怀化 418008) 摘要 ：目的 研究大孔吸附树脂分离纯化翻 白草中总黄酮的工艺条件。方法 比较 AB一8，NKA，NKA一9，D一152，D一 101，ADS一17等6种大孔吸附树脂对翻 白草总黄酮的静态解吸率。结果 D一101型树脂对翻 白草中总黄酮有最好的吸 附分离性能。D一101型大孔树脂分离纯化翻 白草黄酮的最佳工艺条件为：柱体积为 160ml，翻 白草提取物上样量为 62．5ing／ml(以湿树脂体积计)，先用pH4的蒸馏水淋洗，再用30％的 乙醇洗脱，洗脱剂用量为2．5—3倍湿树脂体积。 结论 D一101型树脂是分离纯化翻 白草黄酮的适宜大孔树脂，纯度超过60％，此工艺可行。 关键词 ：翻 白草； 总黄酮； 大孔吸附树脂； 分离； 纯化 中图分类号：R284．2 文献标识码 ：B 文章编号：1008-0805(2008)06．1301-02 大孔吸附树脂是一类有机高聚物吸附剂，近年来被广泛应用 1．0ml亚硝酸钠(1：20)溶液，混匀 ，放置6min，加0．5rrIl硝酸铝 于天然产物的分离…。根据其孔径 ，比表面积构成类型分为许 (1：10)溶液 ，混匀，放置6min，加 1mol／L的氢氧化钠4ml，再加 多类型。翻白草为蔷薇科委陵菜属多年生草本植物 J，主要成 水至刻度，摇匀，放置 15min，用分光光度法在入=500nm处测定 分为乌苏酸和大量的黄酮类化合物。近年来，翻 白草更多的药用 吸光度 ，用最小二乘法作线性回归得芦丁浓度 (y)与吸光度 () 价值被发现，民间流行用翻白草治疗糖尿病并取得不错的疗效。 的关系曲线的回归方程式：Y=0．8577X一0．0005，R =0．9992。 翻白草醋酸乙酯萃取物有较强的降血糖作用，能调血脂、清除自 2．3 大孔树脂 的处理 将 AB一8，NKA，NKA一9，D一152，D一 由基、抑菌等，且毒性极小。翻 白草的主要药理活性成分为黄酮 101，ADS一17大孔树脂依次用 2音体积 5％NaOH水溶液浸泡 类物质 。。近年来有关翻 白草中黄酮类的测定与分析时有报 24h，1倍体积蒸馏水 ，2倍体积 10％盐酸洗涤，最后用蒸馏水洗 道 ，但是尚未见采用大孔树脂分离纯化翻白草中总黄酮的系 至中性。以．乙醇湿法装柱，用93％乙醇在柱上流动淋洗 ，不时检 统报道，故本实验对AB一8，NKA，NKA一9，D一152，D一101，ADS 查流出的乙醇液，至乙醇液与水混合(1：5)无 白色浑浊为止，然 一 17等6种树脂进行筛选，旨在探索适合分离纯化翻白草中总 后以大量蒸馏水洗去乙醇。 黄酮类物质的最佳大孔树脂及纯化的最佳工艺。最终筛选得到 2．4 大孔树脂的筛选 将浓度为50mg／ml的翻白草提取物水溶 对翻白草中总黄酮有最好的吸附分离性能树脂，且分离和纯化翻 液分别通过6种不同型号的已预处理好的树脂柱，进行动态吸 白草中黄酮类成分 (以翻 白草总黄酮为主)纯度达到62．48％，为 附。用 1％FeCI检查流出液，待反应呈阳性 (检测显色)时，表明 纯化翻白草提取物奠定了基础。 已有黄酮流出，树脂吸附达饱和，停止上样，记录上柱量 ，计算总 1 仪器与试药 黄酮吸附量，单位为 mg／ml。上样后的树脂柱先用水洗至无色并 752p紫外分光光度仪(上海光谱仪器有限公司)；ALIlM 电 用浓硫酸检测至无糖反应，再用93％乙醇洗脱至洗脱液无色止。 子天平(Mettler—Toledo仪器公司)；KQ一500DE型医用超声波 将乙醇洗脱液蒸干、称重、测定总黄酮含量、计算总黄酮回收率。 清洗机 (昆山超声仪器有限公司)；DF一101B集热恒温磁力搅拌 总黄酮吸附量及总黄酮回收率分别按公式 (1)和 (2)计算： 器(浙江乐清市乐成电器厂)；TDZ5mWSD多管架 自动平衡离心