进出口中药材中真菌毒素的测定（征求意见稿）.docVIP

前 言 本标准是按照GB/T 1.1-2009《标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写的规则》GB/T 20001.4-2001《标准编写规则 第4部分：化学分析方法》SN/T 0001-1995 《出品商品中农药、兽药残留量及生物毒素检验方法标准编写的基本规定》起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国重庆出入境检验检疫局。 本标准主要起草人： 进出口中药材中真菌毒素的测定 范围 本标准规定了进出口中药材中G1、G2T-2 毒素，HT-2 毒素，的液相色谱-质谱/质谱检测方法。 本标准适用于进出口当归、陈皮、五味子、枸杞、大青叶、金银花中黄曲霉素B1、B2、G1、G2、M1、M2，赭曲霉素A,伏马菌素B1、B2，T-2 毒素，HT-2 毒素，的液相色谱-质谱/质谱测定。 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 PBS溶液和甲醇提取，提取液经稀释、过滤后，用免疫亲和柱净化，洗脱液氮吹干定容后，用液相色谱-质谱/质谱测定，外标法定量。 试剂材料 除非另有说明，所试剂均为分析纯，水为水。甲醇：色谱纯。乙腈：色谱纯。酸：色谱纯。 乙酸铵：色谱纯。 磷酸氢二钠。 磷酸二氢钾。 氯化钠。 浓盐酸。0.1 mol/L 盐酸溶液：量取9 mL浓盐酸（4.），用水稀释至1 000 mL。 1 mol/L 溶液：称取40.0 g固体NaOH，1 000 mL。 pH 7.4 PBS溶液：称取2.92 g磷酸氢二钠(4.) 、0.20 g（4.）、0.20 g磷酸二氢钾（4.）和8.00 g NaCl（4.）用900 mL水溶解，用0.1 mol/L 溶液（4.1）或1 mol/L 溶液（4.1）调节pH值到7.4。PBS溶液称取pH 7.4 PBS溶液4.1） mM乙酸铵溶液：准确称取0. g乙酸铵（4.），用水溶解并转移至00 mL容量瓶中，加 mL甲酸（4.），用水定容至刻度。甲醇- mM乙酸铵溶液(40：60，V/V) mM乙酸铵溶液黄曲霉素B1、B2、G1、G2、M1、M2，赭曲霉素A,，伏马菌素B1、B2，T-2 毒素，HT-2 毒素，玉米赤霉烯酮标准品：标准物质纯度为≥98 %，标准品信息见附录A表A.1。 标准储备液：分别准确称取适量标准物质，乙腈配制成浓度为1 mg/mL的标准储备溶液。4 ℃下避光保存。 混合标准工作溶液：分别准确移取一定体积的每种标准储备液，混合后50 ℃氮吹至干后用2 mM乙酸铵溶液重新溶解制成适当浓度的混合标准工作液。4 ℃下避光保存。 免疫亲和柱：Myco6in1TM LC/MS/MS亲和柱，VICAM公司。 滤膜：0.22 μm。液相色谱-质谱/质谱仪：配有电喷雾离子源(ESI)。 分析天平：感量分别为0.1 mg和0.01 g。 高速均质器。 离心机：转速不低于4000 r/min。 恒温氮吹装置。 涡旋混合器。 玻璃微纤维滤纸。 粉碎机。 玻璃注射器。 分析步骤 提取 称取5 g试样(精确到0.01 g)置于具塞塑料离心管中，加入PBS溶液（4.1）25 mL，均质提取2 min000 r/min离心10 min，过滤后得提取液A中加入5 mL甲醇，均质提取2 min5000 r/min离心10 min，取上清液10 mL，用PBS（4.1）稀释100 mL，过滤后得到提取液B。 将50 mL提取液 B全部通过免疫亲和柱（流速控制在1～2滴/秒），然后用10 mL含0.1％吐温的PBS（4.13）淋洗亲和柱，再将5 mL提取液A通过免疫亲和柱（流速控制在1～2滴/秒），待提取液全部通过亲和柱，用5 mL含0.1％吐温的PBS（4.13）和20 mL水淋洗亲和柱，直至空气进入亲和柱，弃去全部流出液；用2 mL甲醇淋洗亲和柱（流速控制在1滴/秒），当甲醇大部分过柱时，停止加压，静置孵育 5 min，再用 2 mL甲醇淋洗亲和柱（流速控制在1滴/秒），收集全部淋洗液；将淋洗液置于 40 ℃下水浴氮气吹干，用1 mL甲醇-2 mM乙酸铵溶液（含0.1%甲酸）(40：60，V/V)溶解残渣，过0.22 μm有机系滤膜，用液相色谱-质谱/质谱测定。 测定液相色谱-质谱/质谱条件a）色谱柱: C18, 5 μm，mm × 150 mm或相当者； b）流动相:乙腈（4.2）（A）和2 mM乙酸铵溶液（含0.1%甲酸）（4.14）（B）梯度洗脱； c）流速: 0.3 mL/min； d) 进样量:20 μL； e）柱温：40 ℃；）黄曲霉素B1、B2、G1、G2、M1、M2，赭曲霉素A,伏马菌素B1、B2，T-2 毒素HT-2