进出口食品中金黄色葡萄球菌肠毒素（A、B、C、D）、大肠埃希氏菌O157细胞毒素等多种细菌毒素的快速检测方法.docVIP

ICS 点击此处添加中国标准文献分类号 SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T XXXXX—XXXX 金黄色葡萄球菌肠毒素（A、B、C、D）、大肠埃希氏菌O157细胞毒素检测--液相芯片法 Detection method of a variety of bacterial toxins about Staphylococcus aureus enterotoxin (A, B, C, D), Escherichia coli O157 cytotoxic----liquid chip method 点击此处添加与国际标准一致性程度的标识 （本稿完成日期：2013-02-28） XXXX - XX - XX发布 XXXX - XX - XX实施 中 华 人 民 共 和 国 国家质量监督检验检疫总局发布 前言 本标准按照GB/T1.1给出的规则起草。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国海南出入境检验检疫局、中华人民共和国黑龙江出入境检验检疫局、中华人民共和国新疆出入境检验检疫局、中华人民共和国云南出入境检验检疫局 本标准主要起草人：李丹丹、徐义刚、季新成、艾军、卓海华、王丹云、吴山楠、黄纪徽。 本标准2012年首次发布。 金黄色葡萄球菌肠毒素（A、B、C、D）、大肠埃希氏菌O157细胞毒素检测--液相芯片法 范围 本标准规定了进出口食品中金黄色葡萄球菌肠毒素（A、B、C、D）、大肠埃希氏菌O157细胞毒素等多种细菌毒素进出口食品中金黄色葡萄球菌肠毒素（A、B、C、D）、大肠埃希氏菌O157细胞毒素等多种细菌毒素金黄色葡萄球菌 （Staphylococcus aureus）、肠出血性大肠埃希氏菌（Enterohemorrhagic Escherichia coli，EHEC）是一种普遍存在于自然界中重要的食源性致病菌。由二者产生的多种肠毒素（taphylococcal enterotoxin，SE）引起的食物中毒是个世界性卫生问题。A。 缩略语 EHEC，Enterohemorrhagic Escherichia coli 肠出血性大肠埃希氏菌Staphylococcus aureus 金黄色葡萄球菌SE，Staphylococcal Enterotoxin，肠毒素1一ethy一3一[3dimethylaminopropyl」earbodiimidehydroehloride 液体食品，取液体检样5mL，加入250mL生理盐水，充分震荡，制成1:50样品均液。 检样的制备等同于GB 4789.10-2010附录B中样品的制备。 液相芯片检测方法 试剂与材料 金黄色葡萄球菌肠毒素（A、B、C、D）大肠埃希氏菌O157细胞毒素Eppendorf管、离心机、可调微量移液器、超声振荡器、旋涡振荡器、微孔板振荡器、电子天平、真空抽滤装置、液相芯片检测系统 样品检测 样品检测步骤 试剂在使用前应复温至室温（20℃-25 ℃）。 取出保存于4℃抗体交联微球（制备方法见附录B），漩涡振荡并超声处理30s后，取适量，用分析缓冲液（配置见附录C）配制成每μL含有60一80个微球。 滤膜板各孔中加入200μL分析缓冲液预湿，在室温下置于摇床上震荡10min。 真空抽滤去除液体，用吸水垫或滤纸吸干板子底部的残留液体； 在样品孔加入50μL/孔样品，阳性质控组孔中加入50μL/孔的金黄色葡萄球菌肠毒素（A、B、C、D）大肠埃希氏菌O157细胞毒素计算公式： PI= 100-（样品平均值/平均值）×100 结果在下列条件成立时进行检测结果判定 （1）阳性对照PI值＞80； （2）50,为阳性；PI＜50，为阴性。 （资料性附录）病原概述 金黄色葡萄球菌 (Staphyloccocus aureus ) 是人类的一种重要病原菌，隶属于葡萄球菌属（Staphylococcus），有“嗜肉菌的别称，是革兰氏阳性菌的代表，可引起许多严重感染。肠出血性大肠埃希氏菌O157属于肠杆菌科埃希氏菌属。革兰氏染色阴性，无芽胞，有鞭毛，动力试验呈阳性。其鞭毛抗原可丢失，动力试验阴性。 金黄色葡萄球菌 （Staphylococcus aureus）、肠出血性大肠埃希氏菌（Enterohemorrhagic Escherichia coli，EHEC）是一普遍存在于自然界中重要的食源性致病菌。由二者产生的多种肠毒素（staphylococcal enterotoxin，SE）引起的食物中毒是个世界性卫生问题。食物中带有的金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌主要是由原料带入或在生产、 包装和烹调过程中污染，在适当的贮存环境下繁殖并产生毒素，而造成食物中毒。金