进出口食品中金黄色葡萄球菌计数检验方法 全自动MPN法.docVIP

前 言 本标准的附录A为规范性附录，附录B为资料性附录。 本标准按照GB/T 1.1-2009给定的规则编写。 本标准由国家认证认可监督管理标准化委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国辽宁出入境检验检疫局、中华人民共和国舟山出入境检验检疫局。 本标准主要起草人：崔妍、沈飚、田卓、胡兴娟、沈葆真、黄大亮、黄晓蓉、周向阳 本标准为首次发布的出入境检验检疫行业标准。 　　　　　　　　　　　　　进出口食品中金黄色葡萄球菌计数检验方法 全自动MPN法 范围 本标准规定了进出口食品中全自动MPN技术对金黄色葡萄球菌计数的检验方法。 本标准适用于除对荧光检测有影响的食品（如：软饮料等）以外的各类进出口食品检验。 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 27405 实验室质量控制规范 食品微生物检测 术语和定义 全自动MPN法（automatism most probable number） 基于泊松分布的最大可能数原理，通过仪器自动检测和计算样品中含菌数量的方法。 检验方法 培养基和试剂 除另有规定外，所用试剂均为分析纯，试验用水应符合GB/T 27405的规定 磷酸盐缓冲稀释液：见附录A.1。 蛋白胨水：见附录A.2 TEMPO STA培养基和STA测试卡1）TEMPO QC试剂盒1）TEMPO全自动微生物定量分析仪1）TEMPO准备站（充填器和计算机系统），TEMPO读数站（读数器和计算机系统）。 恒温培养箱：36 ℃±1 ℃。 高压灭菌器。 天平：感量0.01 g。 无菌广口瓶、均质杯或一次性可过滤均质袋。 均质器或拍击式均质器。 无菌吸管：1 mL（具0.01 mL刻度），10 mL(具0.1 mL刻度)或微量移液器及其吸头。 无菌刀、剪子、镊子等。 充填架、培养架。 样品制备 样品的全部制备过程均应遵循无菌操作程序。冷冻样品应在45 ℃以下不超过15 min或在2 ℃~5 ℃不超过18 h解冻，若不能及时检验，应置于-15 ℃左右保存，在48 h内检验；非冷冻而易腐的样品应尽可能及时检验，若不能及时检验，应置于2 ℃~5 ℃冰箱保存，在24 h内检验。液体样品应先将其充分摇匀。 固体和半固体样品：以无菌操作称取25 g样品，放入装有225 mL磷酸盐缓冲稀释液（4.1.1）或蛋白胨水（4.1.2）的无菌均质杯（无菌均质袋）内，用拍击式均质器或均质器于8000 r/min ~ 10000 r/min均质1 min~2 min，制成1:10样品匀液。 液体样品：以无菌吸管吸取25 mL样品放入装有225 mL磷酸盐缓冲稀释液（4.1.1）或蛋白胨水（4.1.2）的无菌广口瓶内（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠），经充分振摇制成 1:10 样品匀液。 注：若样品本身颜色鲜艳，制备样品匀液时应加大稀释度，减少样品颜色对荧光信号的影响。 操作步骤 TEMPO准备站工作流程 在STA培养基瓶中，无菌操作加入3 mL无菌蒸馏水使培养基溶解。 无菌移取 1:10 样品匀液1 mL加到溶解的STA培养基瓶中，涡旋混匀，制成4 mL接种培养基瓶，相当于 1/40 稀释度的样品，适用于菌含量在10 CFU/mL~49,000 CFU/mL之间的样品，可根据样品污染程度调整稀释度，TEMPO全自动微生物定量分析仪稀释度与计数范围关系见附录A表A.1。 打开TEMPO准备站软件，扫描STA培养基瓶的条形码，输入样品号。在相应样品号下扫描STA测试卡的条形码，然后将STA测试卡插入对应的4 mL接种培养基瓶中，放在充填架上。 将放有STA测试卡和接种培养基瓶的充填架放入TEMPO充填器中，进行充填。 充填完毕，取出充填架，将测试卡移至培养架，置于36 ℃±1 ℃培养24 h~27 h。 TEMPO读数站工作流程 培养时间结束后，取出培养架。 打开TEMPO读数站软件，将培养架放入TEMPO读数器中，进行读数。 读数结束，取出培养架，浏览和打印检验结果。 结果报告 TEMPO读数站自动分析阳性孔数目和样品的稀释度，根据MPN原理计算出检验结果，选择以MPN/g(MPN/mL)或 CFU/g(CFU/mL)的形式报告样品中金黄色葡萄球菌数。 质量控制 参照附录B对仪器和试剂进行日常维护和质量控制。 附录A （规范性附录） 培养基和试剂 A.1 磷酸盐缓冲稀释液 A.1.1 成分 磷酸二氢钾（KH2PO4） 34.0 g 蒸馏水 500 mL A.1.2 制法 贮存液：称取34.0 g磷酸二氢钾溶