地塞米松对视网膜色素上皮细胞增殖的影响.pdfVIP

第 15卷 第 3期 石家庄学 院学报 Vo1．15．No．3 2013年 5月 JournalofSh~iazhuangUniversity Mav2013 地塞米松对视网膜色素上皮细胞增殖的影响 赵 志浩 ．宋 雨 (河北联合大学冀唐学院 临床 医学系，河北 唐 山 063300) 摘 要：检测地塞米松对体外培养的人视网膜色素上皮细胞生长的影响．对hRPE细胞进行常 规培养，取 3—4代生长 良好的细胞用于实验 ，采用M，rI1法研究不 同浓度 、不同作用时间．地塞米松 对hRPE细胞增殖的影响．用免疫细胞化学染色法检测添加不 同浓度、不 同作用时间地塞米松对 hRPE细胞核 内细胞增殖核抗原表达的影响．M，rI法发现小剂量地塞米松促进hRPE细胞 的增殖． 50—200mg／L浓度组随着浓度的增高．hRPE细胞的增殖更加明显．大剂量地塞米松抑制 hRPE细 胞的增殖，且随着浓度 的增高，对 hRPE细胞的增殖的抑制更加明显．免疫细胞化学染色法发现 ． 在 5O一200mg／L浓度组，随着浓度的增高。hRPE细胞核 内PCNA表达增强。光密度值增大。在 400— 800mg／L浓度组 。随着浓度的增高。hRPE细胞核 内PCNA表达减弱 。光密度值减少．小剂量地塞米 松促进体外培养的hRPE细胞的增殖及细胞核 内PCNA的表达 ．大剂量地塞米松抑制体外培养的 hRPE细胞 的增殖及 细胞核 内PCNA 的表达． 关键词 ：地塞米松 ；视网膜色素上皮细胞；增殖；增殖性玻璃体视 网膜病变 中图分类号 ：R988．1 文献标识码：A 文章编号：1673—1972(2013)03—0113—05 0 引言 增生性玻璃体视网膜病变是孑L源性视 网膜脱离及视网膜复位手术后或眼外伤后 的细胞增生 。特别是视 网膜色素上皮细胞和神经胶质细胞增生所产生的玻璃体视网膜增生性病变 ，是导致视网膜脱离复位手术失 败和失明的主要原因．地塞米松玻璃体腔注射抑制 PVR的应用较为广泛 ，能有效减少玻璃体切割术后并发 症的发生．为明确地塞米松在治疗 PVR时的效果 。以及更加精确地掌握地塞米松的有效剂量，笔者设计 了 这一实验 ．采用MTY和PCNA法观察地塞米松对体外培养的hRPE细胞的增殖的影响，从而进一步阐述 PVR的发病机制 ．并为临床治疗提供用药参考． 1 实验 1．1 仪器与试剂 二氧化碳全湿空气培养箱 (FormaScientifc，USA)；NikonEclipseTDIO0倒置显微镜 (Nikon，Japan)； Olympus相差显微镜照相系统(Olympus，Japan)；超净工作台(YJ一1450型，吴江市净化设备厂)；FA1604N电 子分析天平 (上海民桥精密科学仪器有限公司)． 胎牛血清 (FBS)使用前 56℃水浴 30min灭活补体 ，分装至 10mid瓶 ，保存于一20℃冰箱 ，购于北京 中杉 生物有限公司． DMEM(低糖型)分装为 90mL／瓶 。保存于 4℃冰箱 (购于北京中杉生物有限公司)． PBS缓冲液 PBS粉剂加三蒸水至 1000mL，在磁力搅拌器上搅拌 ，用氢氧化钠调 pH值至 7．2—7．4，分 装 ．高压灭菌。4℃保存．兔抗人 Ot—SMA抗体购于北京博奥森生物公司． 地塞米松为市售注射剂．鼠抗人角蛋 白单克隆抗体、鼠抗人PCNA单克隆抗体、胰蛋白酶、MTY，DAB显 收稿 日期 ：2012—06—12 作者简介 ：赵志浩(1990一)，男，河北唐 山人 ，助教 ，主要从事眼视光学研究 114 石家庄学 院学报 2013年 5月 色试剂盒 、二甲基亚砜 (DMSO)购于北京中杉生物有限公司． 1．2 试剂的配制 1．2．1 浓缩型 DAB试剂 的配制 浓缩缓冲液 (A)；DAB溶液(B)。浓缩过氧化氢缓冲液 (C)准备 1mL双蒸水 ，加入一滴试剂A，混合均 匀 ．然后将试剂 B和试剂 C各 1滴加入其中，再次混匀．溶液现配先用 ，避光保存． 1．