日本脑炎病毒套式RT—PCR方法的建立与初步应用.pdfVIP

动物医学进展。2009，30(12)：5-8 ProgressinV eterinaryM edicine 日本脑炎病毒套式 RT—PCR方法的建立与初步应用 李茂宁 。，赵 武 ，陈云霞 。，梁家幸。，肖爱欢 ，李 斌。，刘 芳 ，何 颖。， 梁保忠。，甘书钻。，黄伟坚¨ (1．广西大学动物科学技术学院，广西南宁 530005；2．广西兽医研究所 ，广西南 宁 530001； 3．广西动物卫生监督所 ．广西南宁 530001) 摘 要 ：根据 GenBank上登录的 日本脑炎病毒 (JEV)E基 因序 列，设计 内外 2对 引物 。以JEV疫苗株 为模板 ，建立 了检测猪 JEV 的套式 RT—PCR方法 。应用该方法对 JEV疫苗株 RNA进行扩增 ，获得与预期 大小相符，长度为 228bp的 目的片段 ；检 出JEVRNA 的灵敏度约为0．3pg。表 明所建立的套式RT—PCR 方法对JEV 的检测敏感性高、特异性强 。 关键词：日本脑炎病毒 ；套式RI、。PCR；检测 中图分类号 ：$852．659．6 文献标识码 ：A 文章编号 ：l007—5038(2009)12—0005—04 日本脑炎 (Japaneseencephalitis，JE)，又称 乙型 得到了广泛的应用。在 RT—PCR法的基础上 ，本试 脑炎，流行性乙型脑炎 ，简称 乙脑，是 由 日本脑炎病 验建立了检测猪JEV的套式 RT—PCR方法。 毒 (Japaneseencephalitisvirus，JEV)引起的一种人 1 材料与方法 畜共患的 自然疫源性传染病 ]。JEV主要通过带病 1．1 材料 毒的蚊虫叮咬而传播，其中三带喙库蚊为主要媒介 ， 1．1．1 疫苗株和细胞 猪 日本脑炎病毒 (JEV)疫 而猪是JEV 的主要增殖宿主和传染源。JEV可 引 苗株 (弱毒株)由中牧实业股份有限公司成都药械厂 起怀孕母猪流产、产死胎或弱仔 ，公猪睾丸炎 ，少数 生产；人 日本脑炎病毒 (JEV)疫苗株 (减毒株)由武 仔猪出现神经症状 ，给养猪业造成 巨大的经济损 汉生物制品研究所生产 ；BHK一21细胞 由广西大学 失 。 动物科学技术学院预防兽医实验室保存。 JEV属于黄病毒科 ，黄病毒属 。其基因组为单 1．1．2 试剂 Trizol、即用 PCR扩增试剂盒 (含染 股正链 RNA，全长约 11kb，仅有一个几乎跨越整个 料)、Biospin胶回收试剂盒为上海生工生物工程技术 基因组的单一开放 阅读框 (ORF)。ORF编码…个 服务有限公司产品；dNTPMixture、Ribonuc1easeInh|h— 多聚蛋 白前体 ，经宿主、病毒蛋 白酶切加工 ，产生 3 itor为宝生物工程 (大连)有限公司产品；MMLVRe— 个结构 蛋 白 (C、prM／M、E)和 7个非结构 蛋 白 verseTranscriptase为Promega公司产品。 (NS1、NS2A、NS2B、NS3、NS4A、NS4B、NS5)。囊 1．2 方法 膜糖蛋白E是主要的结构蛋 白，也是毒粒表面最重 1．