猪圆环病毒2型湖南株的分离与序列分析.pdfVIP

动物医学进展 。201O，31(1)：31—35 ProgressinVeterinaryM edicine 猪圆环病毒 2型湖南株的分离与序列分析 何世成 ，刘道新 ，张 志。，鲁杏华 ，吴发兴。，邹 敏。，谈志祥 ，郭成玲。，张燕霞 (1．湖南省动物疫病预防控制中心，湖南长沙 410007；2．中国动物卫生与流行病学中心，山东青岛 266034； 3．湖南省动物卫生监督所 ，湖南长沙 410007) 摘 要：为了解湖南省猪群 中猪猪 圆环病毒 2型(PCV一2)的流行变异情况 ，从 2003年一2008年湖南省 疑似 PMWS病死猪组织中分离获得 7株PCV--2流行毒株 ，分别命名为 HuN一03、HuN一05、HuN一0601、HuN一 0602、HuN一0701HuN一0702、HuN一08。用PCR方法对这 7株病毒进行全基 因扩增及测序分析。结果显示， 7株 PCV一2分离株基因组全长均为 1767bp，有典型的PCV一2基因组结构；病毒毒株间同源性在 94．9 ～ 99．3 之 间，与GenBank中的13株 PCV一2基 因组 同源性在 93．6 ～99．7 之 间，与 2株 PCV一1亲缘关系 较远 ，同源性只有75．7％～76．5 ；在遗传演化关系上，7株分离株分属 4个进化方向，HuN0·601可能是外 来毒株，HuN一03在一个独立的进化方向内，可能是其他 5株病毒的母源性毒株，其他 5株病毒可能代表 了 两个遗传种群 ，一个是国际流行稳定毒株 ，一个是 国内地域性流行毒株 。 关键词 ：猪猪圆环病毒 2型；分离；序列分析 中图分类号：$852．659．2；$858．28 文献标识码 ：A 文章编号：1007--5038(2010)01-一0031-05 猪猪圆环病毒 2型 (Porcinecircovirustype2， 1 材料与方法 PCV一2)是圆环病毒科圆环病毒属的成员，是导致断 1．1 材料 乳后仔猪多系统衰竭综合症 (Post-一weaningmulti— 1。1．1 病料与试剂 病料为 2003年一2008年湖 systemicwasting syndrome，PMWS)的主 要 病 南省内疑似 PMWS病死猪 的组织 (包括肺与淋 巴 原Ⅲ 。自1997年加拿大首次报道 [2以来 ，已在许多 结)。PK一15细胞、宿主菌TG-I由农业部动物检疫 国家出现感染和流行。1999年朗洪武在北京、河北 所流行病研究中心实验室提供 ；pMD 18-一TVector、r 等地猪场中首次检测到猪圆环病毒 2型在我国的存 Taq、dNTPs、DNA Marker、氨苄青霉素 (Amp)、 在0]，此后国内许多实验室也相继检测、分离到该病 DNA胶纯化 回收试剂盒购 白宝生物工程 (大连)有 毒 ，并进行很多相关研究[4]。 限公司。DNAzolReagent为 Invitrogen公司产品。 根据 PCV致病性和核酸序列的不同，猪圆环病 HindUI、BamHI内切酶购 自Promega公司。 毒可分为PCV-一1和PCV．一2，PCV-一1认为是 PK一15细 1．1．2 引物 参考 GenBank2003年上海 PCV2分 胞培养的污染物，无致病性 ，基 因组全长 1759bp， 离株全基 因组序列(AY291318)，利用 DNAStar软 而 PCV-2却具有致病性 ，并 已认为 PCV-2