低能离子束注入红色链霉菌的育种的研究.pdfVIP

发酵工程学科的进展 ——第四次奎回发酵工程学术计论奢论文采 低能离子束注入红色链霉菌的育种研究 李宗伟。 陈林海，王雁萍， 苏明杰，秦广雍 (郑州大学离子束生物工程省重点实验宣，郑，lI450052) 摘要：应用低能N+离子束注入红霉素产生苗一红色链霉菌(Streptomyceserythreus)进行 诱变选育，结合琼脂块筛选法，经过多轮次诱变筛选，得到高产菌株K79。摇瓶发酵产量由 出发菌株的3186u／ml增加到4850u／m1．提高了52．2“。通过对发酵培养基进行了正交试 验，在最佳培养基条件下，菌株K79摇瓶产量可达5315u／ml。 关键词：低能高于束f红霹素；红色链霉菌 低能离子束注入技术由于其独特的作用机理，在生命科学中有着广泛的应用“]。在 农作物育种方面的研究获得了可喜的进展[…。在工业微生物育种方面，龚加顺桑金隆 等口1以之江菌素产生菌玫瑰黄链霉菌杭州亚种93-15-32(Streptomycesroseoflcz口U$sub— sp．hangzhouensisn．subsp．93—15—32)为出发株，筛选到的高产株效价比出发株提高4倍 coeruleorubidus 多。刘连碧等[73用低能N+对天蓝淡红链霉菌SIPll482(Streptomyces SIPll482)进行诱变选育，获得了产抗能力提高了15倍的高产菌株。离子束注人技术在 农作物和微生物育种中的广泛应用及其良好的诱变效果，显示出离子束注入诱变具有突 变谱宽及突变率高的特点，说明离子注入是一种新的、较为有效的诱变方法。 目前我国红霉索o。]的发酵生产水平与国外研究o””相比有较大的差距。长期以来 国内研究者对红霉素高产菌株的选育进行了大量工作．但发醇水平提高却十分缓慢。张 金国等o”以S．erythreus0-1l一26为出发菌株，经LiCl和紫外线复合诱变处理，获得突 变株效价提高29．1％。刘峰等o”通过红霉素耐前体物的筛选，突变株发酵水平提高了 15．2％。陈宇[1”用N+离子注人红霉素产生菌后产生可遗传的变异，筛选得到高产突变 菌株，摇瓶发酵产量提高20％。本研究将低能离子束注入技术应用于红色链霉菌的诱变 选育，以期筛选到高产的菌株。 l实验材料与仪器 1．1菌种与试剂 出发菌：红色链霉菌(Streptomyces erythreus) CMCC(B)63 生物效价鉴定菌：短小芽孢杆菌[Bacilluspumillus 202] 无机盐类为分析纯，其它试剂为生化级。红霉素生测标准品(923u／mg中国药品生 物制品检定所监制)。 1．2培养基 NaCl 分离及斜面培养基(蹦)：淀粉1．0；玉米浆1．0；CaCO。0．25I 0．3， 李宗伟等：低能离子柬注入红色链霉菌的育种研究 141 种子培养基(％)：淀粉3．5}黄豆饼粉1．7；玉米浆0．9；花生饼粉1．5 f葡萄糖3．5 ；蛋白胨1．3；(NH4)2SO．0．6；KH2PO,0．015；酵母粉0．5；CaC030．9；NaCl0．4}Mg— sq0．025；自来水配制，pH6．8，115℃灭菌30rain。 KRPo．0．015}CaCOa0．7；自来水配制，pH6．8，115(2灭菌30rain。 测定培养基(％)：牛肉膏0．3；蛋白胨0．5；KzHPo‘0．3；琼脂粉1I2；自来水配制， 121℃灭菌30rain。 pH7．8-8．0 1．3实验仪器 离子注入机,ZP-96型旋转摇瓶机；ZY一300IV型抑菌圈自动测量分析仪。