针刺对大鼠脑缺血再灌注后脑细胞内钙稳态的影响及脑保护的机制探讨.pdfVIP

华东地区第十届实验动物科学学术交流会 267 针刺对大鼠脑缺血再灌注后脑细胞内钙稳态的 影响及脑保护的机制探讨 张秋玲，张家勇，李呜 (山东省泰山医学院实验动物中心，泰安271016) 【摘要】 目的探讨针刺对抗脑缺血再灌注所致脑细胞凋亡的机制。方法 采用线栓法制作SD h处 大鼠脑缺血再灌注动物模型i于脑缺血30min再灌注30min时给予针刺干预，于再灌注72 死动物取材，分别作脑细胞内游离钙、CGRP和脑细胞凋亡的检测。结果针刺干预组与单纯脑 凋亡数目明显增多(尸≮O．05)。结论针刺通过调节钙稳态及介导CGRP的分泌，减少脑缺血再灌 ’ 注后脑细胞的凋亡，增强脑组织对脑缺血缺氧的耐受性。 [关键词]针刺；脑缺血再灌注；细胞凋亡；降钙素基因相关肽；钙。 脑缺血再灌注损伤机制复杂，针刺作为治疗中风的有效方法，目前在国内外已得到广泛应用，本实 验用针刺干预线栓法制作的大鼠局灶性脑缺血再灌注动物模型，观察针刺对大鼠急性局灶性脑缺血再灌注 related 后脑细胞内游离钙、降钙素基因相关肽(calcitoningene 针刺保护神经元的内源性机制。 1材料与方法 1．1仪器与试剂 Radiance 2100型激光共聚焦显微镜，购自美国Bio 自美国Media (韩氏穴位神经刺激仪)，购自北京华卫产业开发公司；Flow．3购自美国Molecular Transferase，, 自Sigma公司；降钙素基因相关肽一抗、末端脱氧核糖核酸转移酶(Terminaldeoxylnucleotidy 唑红(2，3，5-triphenyltetrazoliumchloride，TTC)、蛋白酶K(ProteinaseK)，购自美国Sigam公司；降 钙素基因相关肽试剂盒、细胞凋亡试剂盒，DAB显色试剂盒，购自武汉博士德生物公司。 1．2实验动物分组及模型制作 严格选择体重220±10 g的成年SPF级SD大鼠20只，雌雄各半，由山东省中医药大学实验动物中 6只，另2只作TTC染色。按照本实验室常规线栓法局灶性脑缺血再灌注动物模型的制作方法作大脑中 动脉局灶性脑缺血30min再灌注手术及假手术【l】。 1．3针刺方法 参考华兴邦编著的《实验动物穴位图谱》给大鼠穴位定位，选取“水沟”和“百会”二，应 mA，以肌肉轻 用韩氏穴位神经刺激仪进行穴位针刺刺激，频率2～15Hz，间断疏密波，电流强度l 微震颤为度，针刺治疗组的大鼠于脑缺血再灌注30min用28号l寸毫针给予针刺，间断疏密波，刺激 强度从3mA开始，每10min增加lmA，终强度为5mA，持续时间30min，每天一次，连续三次， 最后一次针刺结束后30min处死动物取材。其余二组不作针刺刺激。 268 华东地区第十届实验动物科学学术交流会 ’ 1．4 TTC染色 取脑缺血20 h的大鼠，戊巴比妥钠腹腔麻醉后，剪开右心房，经左心室生理盐水充分灌洗后10％ TTC缓慢灌注100 ml，将大鼠置于38℃湿热恒温箱内孵育1h，取出再行4％多聚甲醛左心室灌注固定， 断头取脑4％多聚甲醛后固定6h，作额状切片，切片厚度2mm，可见脑组织梗塞区显示白色，非梗塞 区显示红色，二者界限清晰可辨。 1．5激光共聚焦显微镜检测细胞内游离钙 于脑缺血再灌注72h将所有大鼠麻醉