在inside-out膜片上caffeine对猪冠状动脉平滑肌细胞钙激活钾通道的调节作用及ryanodine的影响.pdfVIP

中国病理生理杂志 ChineseJournalofPa 卫 ! i2； = · 53 · [文章编号] 1000—4718(2010)0l一0053—06 在 inside—out膜片上 caffeine对猪冠状动脉平滑肌 细胞钙激活钾通道的调节作用及 ryanodine的影响木 仲维高 ，杨 艳 ， 曾晓荣 ， 崔 跃 ， 孔天翰。△ (’广州医学院蛇毒所，广东 广州510183；中山大学疼痛研究中心，广东 广州510080； 泸州医学院心血管医学研究所，四川 泸州 646000) [摘 要] 目的：利用膜片钳技术，研究咖啡因对钙激活钾通道(calcium—activatedpotassiumchannel，Kc。)的 作用机制，及咖啡因存在时兰尼定 (ryanodine)对 K 的影响以阐明冠状动脉平滑肌的调控机制。方法：采用急性 酶分离方法，应用膜片钳单通道电流记录技术记录猪冠状动脉平滑肌钿胞上K。电流活动。电流信号经放大、滤波 及A／D、D／A转换后输入微机进行采样和储存。应用PCLAMP9．0软件系统进行数据采集及分析。结果：在内面 向外式 (inside—out)膜片下，咖啡因(0．1、0．5、1．0、5．0mmot／L)可浓度依赖性地增加通道开放概率，而对电流幅 值无明显影响，开放概率增加是通过明显缩短平均关闭时间实现的(n=8，P0．01)；洗去药物后通道活性可以恢 复到对照水平；5．0mmol／L咖啡因对 K 激活作用最大 (P0．01)。在细胞贴附式(cell—attached)膜片上，咖啡因 激活K。后，ryanodine(10—40~mol／L)浓度依赖性地抑制通道开放概率 ，开放时间缩短，关闭时间延长，对电流幅 度无明显影响。结论：在 inside—out膜片下，咖啡因能够直接激活猪冠状动脉平滑肌细胞K 通道。在 cell—atta· ched构型上，ryanodine可通过胞内一定的信号通路浓度依赖性间接抑制咖啡因对K。激活。 [关键词] 咖啡因；钾通道，钙激活；Inside—out膜片；兰尼定；猪冠状动脉平滑肌细胞；Cell—attached膜片 [中图分类号] R331．3 [文献标识码】 A Effectsof caffeine and ryanodine on Kc in porcine coronary artery smoothmusclecells ZHONG Wei—gao ，YANG Yan ，ZENG Xiao—rong ，CUIYue ，KONG Tian—han (InstituteofSnakeVenom，GuangzhouMedicalColelge，Guangzhou510183，China；PainResearchCenter，SunYat—sen University，Guangzhou510080，China； InstituteofMyocardialElectrophysiology，LuzhouMedicalCollege，Luzhou 466000，China．E—mail：zhongweigaoO1@163．corn) [ABSTRACT] AIM：Tostudytheeffectofcaffeineonthelargeconductancecalciumactivatedpotassium (Kc) chnanelsbypatch —clamp technique on smooth musclecellsenzymatically isolated from the porcinecoronary artery (PCASMC)，andtoinvestigatetheeffectofrynaodineonKcbeingactivatedbycaffeine．METHODS：Usingthesingle channelpatch—clamptechnique，singlePCASMCWas isolatedbycollagenase，theactivity