环境藻毒素降解菌的筛选与鉴定方法的初步研究.pdfVIP

·142· 第十届全国环境与职业医学研究生学术研讨会论文集 藻毒素在一般的环境条件下非常稳定，研究者对活性炭吸 液中藻毒索浓度。测定条件：流动相甲醇：水(含O．05％三氟 附、光降解与光催化氧化、臭氧氧化、化学药剂氧化、膜过滤 等技术进行了研究，均很难将其去除，且从技术和经济角度来 量20吐；柱温400C。根据色谱图中的保留时间(Rt)以及光谱 看，并不是很有效的手段…。微生物降解法因具备操作方便、 图的最大吸收波长(),max J与标样比较进行定性分析；以色谱 处理效率高、成本低等优点而成为研究热点，如采用生物膜过 峰峰面积进行外标法浓度定量分析。 滤可有效去除藻毒素[2-3]。但是，由于藻毒素具有环状结构和1．3单个菌种的分离 间隔双键，具有强的化学稳定性和对细菌肽酶的抵制作用【4】， 称取太湖水污染处理研究基地蓝藻堆积点中得到的藻泥 使得微生物法降解藻毒素效果差，作用时间长。因此筛选高效 PBS缓冲液中，震荡培养，静置30rain。吸取 109，加入90raL 降解藻毒素的菌种是将微生物降解法用于湖泊生态修复的关 lOmL上清混合菌液于试管，梯度稀释至107倍。分别吸取混 键。 合菌液100mL于固体细菌培养基中央位置，再用三角玻棒涂 PARK掣5】从一富营养化严重的湖泊中分离出一种Y2细菌，布均匀。30℃培养。待长出菌落后挑取不同形态和颜色的菌落 进行划线分离，得到单个菌落并保存。 对藻毒素RR和氓的最大降解速率分别为每天13和514ng／L， 鉴定为鞘氨醇单胞菌。钟升等【6】从巢湖底泥中分离出一株菌 1．4藻毒素降解茵的筛选 株M9，在48h内对初始浓度分别为17．1mg／L的藻毒素RR和藻毒素降解菌的筛选采用M9选择性液体培养基为基础培 养基，添加蓝藻中提取的藻毒素粗提液作为主要的碳源和氮源 11．3mg／L的藻毒索LR的降解率分别达到70．0％和81．6％，该菌 鉴定为吉氏库特菌。 制成藻毒素降解菌选择性液体培养基进行培养，通过48h后藻 随着仪器分析技术的进步和计算机的广泛应用，微生物菌 毒素含量的减少程度判断该菌降解藻毒索的能力。具体操作 为： 种鉴定已进入基于仪器自动化分析阶段【7匕Biolog微生物自动 分析系统是美国Biolog公司从1989年开始推出的一套微生物鉴将分离得到的单个纯菌落分别接种于15mL细菌液体培养 定系统，该系统主要是根据细菌对95种碳源的利用情况及其数 据库内信息，经计算机分析比较，实现对待测菌的鉴定[s】。由 于其具有操作简便、自动化程度高、鉴定快速、采用标准化程 心。收集菌体。收集得到的菌体加入5009L藻毒素降解菌选择 序和耗材少等优点，已成为细菌分类鉴定的常用技术手段[9-10】。 将Biolog微生物自动分析系统应用于藻毒素降解菌筛选和鉴定 中，可有效缩短鉴定时间，同时提高鉴定的准确性。 量。以无菌的藻毒索降解菌选择性液体培养基作为空白对照， 本实验室对环境藻毒素降解菌筛选与鉴定的思路进行了 计算藻毒素降解率，初步确认分离所得的微生物降解藻毒索的 探讨并初步构建了基本方法，从太湖水污染处理研究基地蓝藻 能力强弱，并选择其中的降解率较高的菌株做进一步实验。降 解率计算公式为：藻毒索降解率=[(对照组藻毒素含量一实 堆积点分离出藻毒素降解菌LTH-3，利用Biolog微生物自动分 析系统对其进行鉴定。以期建立一套快速、有效的环境藻毒素 验组藻毒素含量)，对照组藻毒素含量]×100％。 降解菌筛选与鉴定方法，为以后将藻毒素降解菌应用于太湖水 1．5藻毒素降解茵茵种