第六章植物原生质体培养和体细胞杂交.ppt

原生质体培养的意义 (1)建立单细胞无性系 (2)用于原生质体融合 (3)遗传转化的良好受体 (4)多种基础理论研究的实验材料 1、原生质体培养方法 　　　　　　 (1)液体浅层培养 优点：原生质体在液体环境中有较强的吸收营养物质的能力，表现出较强的细胞分裂能力。操作简单，对原生质体的损伤小，且易于添加新鲜培养基和转移培养物。 缺点：原生质体分布不均匀，常常发生原生质体之间的粘连现象而影响其进一步的生长和发育。此外，难以跟踪观察某一个细胞的发育情况。 (2)固体平板培养 优点：使原生质体处于固 定位置，避免了原生质体的 漂浮游动，有利于对单个原生质体的细胞壁再生及细胞团形成的全过程进行定点观察。 缺点： 培养基温度对薄层质量和原生质体分布有一定影响；另外，固体中单细胞生活能力弱，通气状况不良，第一次细胞分裂时间会推迟2d左右。 (3)液体-固体双层培养法 优点：固体培养基中的营养物质 可以缓慢放到液体培养基中，如果在下层固体培养基中添加一定量的活性炭，则还可能吸附培养物产生的一些有害物质，促进原生质体的分裂和细胞团的形成。 缺点：不易观察细胞的发育过程。 2、植株再生过程 植株(原生质体)再生过程是指分离、纯化的原生质体在适当的培养方法和良好的培养条件下，很快恢复细胞壁，再生细胞持续分裂形成细胞团，最后或通过愈伤组织或通过胚状体分化出完整植株的过程。（1）细胞壁再生 （2）细胞分裂 （3）植株再生 （1）细胞壁再生 再生所需时间与植物种类和起源细胞的分化程度及生理状态有关。 再生过程：先是质膜合成细胞壁主要成分微纤维，然后在质膜表面进行聚合作用，形成多片层的结构，以后在质膜和片层结构之间或在膜上产生小纤维丝，逐渐形成不定向的纤维团，最后形成完整的细胞壁。 细胞壁再生是细胞分裂的先决条件 （2）细胞分裂 （3）植株再生 植株再生有两种途径： 　 通过愈伤组织诱导器官形成途径 　 通过诱导胚状体途径 3、影响原生质体培养的因素 （1）材料 （2）培养基 （3）渗透压稳定剂 （4）原生质体的培养密度 （5）培养条件 原生质体的分离培养与植株再生(动画) 4、原生质体培养的操作实例 7a: 分离原生质体10天后第1次分裂 7b,c:2和3周龄小细胞团 7d,e: 4和6周龄小愈伤组织 7f: 转到 B5h 培养基前8周龄小愈伤组织 紫花苜蓿叶片原生质体分裂、克隆体的发育及通过体细胞胚再生小植株 4、原生质体培养的操作实例 8a: 转到 B5H 培养基上的小愈伤组织和体细胞胚诱导 8b: 转到 Boi2y 培养基上的球形胚 8c: 转到MS培养基上的子叶期胚以转化为小植株 紫花苜蓿叶片原生质体分裂、克隆体的发育及通过体细胞胚再生小植株 三、植物体细胞杂交 1、体细胞杂交 两种异源（种、属间）原生质体，在人工控制条件下，相互接触从而发生膜融合，胞质融合和核融合并形成杂种细胞的过程。 2、体细胞杂交的意义 （1）实现远缘杂交，形成新的物种 （2）创造细胞质杂种 （3）培育作物新种质和新品种 生物种类 细胞来源 成功年代 烟草两个种间 苷蓝——青菜 大豆——马唐草 矮牵牛——龙面花 大麦——花生 大麦——大豆 小麦——矮牵牛 油菜——大豆 玉米——大豆 大豆——野豌豆 大麦——蚕豆 大豆——草香木犀 酵母菌——鸡 大豆——烟草 大豆——秋水仙 番茄——马铃薯 叶——叶 叶——根 愈伤组织——叶 叶——花瓣 种子——种子 叶——悬浮细胞 叶——花瓣 叶——悬浮细胞 叶——悬浮细胞 悬浮细胞——悬浮细胞 叶——根 悬浮细胞——叶 原生质体——血红细胞 悬浮细胞——叶 悬浮细胞——叶 叶——根尖 1972 1972 1972 1972 1972 1972 1972 1972 1972 1972 1972 1972 1972 1972 1972 1972 3、原生质体融合的类型 （1)自发融合 同种细胞在培养时2个靠在一起的细胞自发合并，称自发融合； （2)诱发融合 指将植物原生质体制备出来后，再加入诱导剂或用其他方法促使两亲本原生质体融合的方法。 4、原生质体融合的类型(动画) 5、原生质体融合的方法 （1)化学诱导融合：利用化学融合剂，促使原生质体相互靠近、粘连融合的方法。 无机盐诱导融合法 高pH-高Ca2+诱导融合法 PEG诱导融合法 PEG-高pH-高Ca2+诱导融合法 （2)电诱导融合法 利用改变电场来诱导原生质体彼此连接成串，再施以瞬间强脉冲使质膜发生可逆性电击穿而使原生质体融合的方法。 电诱导融合法(动画) 6、体细胞杂种的筛选及再生植株鉴定 （1)杂