第十三章动物细胞融合.pptVIP

1、单克隆抗体的特性 （1）高度特异性 所有抗体分子对抗原的反应性均具有高度的选择性和专一性 即高度特异性。 （2）高度稳定性 单克隆细胞所分泌的抗体分子在结构上高度均一，甚至在氨基 酸序列和空间构型上是相同的。 （3）高抗体活性 （4）不可知性 2、单克隆抗体的制备过程 （1）融合细胞的准备 （2）细胞融合 （3）杂交瘤细胞的选择性培养 （4）抗体筛选及克隆化培养 （5）单克隆抗体的生产 （6）克隆抗体的鉴定 单克隆抗体制备基本流程 3、单克隆抗体的应用 （1）单克隆抗体具有高度的特异性与灵敏性，可以广泛地由于临床医学的疾病诊断，以提高疾病诊断的准确性。 （2）利用单克隆抗体技术可以生产各种免疫疫苗，这不仅能大大降低生产成本，同时也增加了疫苗的安全性。 （3）单克隆抗体还有可能用于某些肿瘤的治疗，是人类战胜癌症十分有望的潜在技术。 （4）单克隆抗体技术还可广泛用于各种基础医学研究，从而 推动现代医学的不断发展。 谢谢大家！ 第十三章 动物细胞融合 主要内容： 第一节 细胞融合的基本概念与方法 第五节 淋巴细胞杂交瘤和单克隆抗体 学习的目标与要求： 掌握细胞融合的各种方法及意义，认识单克隆抗体的制备过程及其应用。 杂交斑马：由斑马和马科 动物杂交产物。 狮虎：狮子和老虎的杂交 产物。 豹狮：美洲豹与狮子的杂 交产物。 一、细胞融合的基本概念与方法 1、细胞融合的概念和意义 细胞融合(cellfusion)也叫细胞杂交(cell hybridization)，或者体细胞杂交(somatic hybridization)：是指在离体条件下，使用人工方法使两个或两个以上的单个细胞通过无性生殖的方式合并形成一个细胞的技术。 细胞融合的意义 （1）对于植物也叫“原生质体融合”。 （2）不仅能产生同种细胞融合，也能产生种间细胞的融合，因此在创造新细胞、培育新品种方面意义重大。 （3）植物：体细胞杂交培育新品种 （4）动物：单克隆抗体生产，抗肿瘤疫苗等 2、细胞融合的分类 （1）从亲本来源上 同核体(Homokaryon) 基因型相同的细胞融合 异核体(Heterokaryon)来自不同基因型的融合细胞 （2）从融合效果上 对称融合(Symmetricfusion) 两个完整的细胞间的 融合 不对称融合(Asymmetricfusion) 利用物理或化学方法使某亲本的核或细胞质失活后再与另外一个完整的细胞进行融合。 对称融合 不对称融合 3、细胞融合的方法 ??生物法、化学法及物理法。 ??原理：增加细胞间的粘附、改变膜的通透性。 （1）病毒诱导融合 各种病毒(例灭活的仙台病毒、副流感病毒和新城鸡瘟病毒) 都有凝集细胞的能力，一边粘接在一个细胞表面，另外一边粘接在另一个细胞表面，使两个细胞在病毒的作用下靠近发生凝结。 仙台病毒(HVJ，Hemagglutinatingvirus of Japan )是两层磷脂组成的外膜包裹着RNA与蛋白质的复合体。因HVJ病毒毒力弱，易被灭活而常采用。 特点：研究最早的促融剂，应用HVJ技术有很多缺陷，细胞感染率低融合速度慢融合体的去病毒困难。 过程 （1）灭活后的病毒颗粒结合到原生质体表面，细胞开始凝聚; （2）细胞膜紧密结合，病毒被膜与细胞浆膜融合。病毒颗粒周围的膜脱离整个膜产生破口，在两细胞间形成细胞质通道(37℃1-2 min)，通道继续扩大，病毒颗粒流入细胞质内，细胞质互相融合; （3）融合细胞变圆，融合过程结束。 （2）化学方法诱导融合 可以采用的化学诱导剂包括：NaNO3、高pH的高浓度Ca2+离子、聚乙二醇（PEG）、溶菌酶、明胶、植物凝血素伴刀豆球蛋白A等。细胞膜电荷平衡被打破。 PEG (Polyethylene glycol,聚乙二醇)是一种多聚化合物，分子式为H(OHCH2-CH2)nOH)。 PEG诱导：PEG与溶液中自由水结合，高度脱水后引起原生质体凝聚、扭曲变形、细胞膜连接处发生融合，形成很小的细胞桥，之后扩大，最终彻底融合。 优点：成本低异核率较高不受物种限制 缺点：过程繁杂对细胞有毒害