沉默NANOG表达对人肝癌细胞HepG2中cyclin D1表达及细胞增殖的影响.pdfVIP

ChineseJournalofPathophysiology 2014，30(2)：245-249 · 245 · [文章编号] 1000．4718(2014)02．0245．05 沉默NANOG表达对人肝癌细胞 HepG2中 cyclinD1表达及细胞增殖的影响米 周嘉嘉， 陈汝福 ， 邓小耿， 周 雨， 周泉波， 张 杰， 伍耀豪， 曾乐祥， 邱荣林 (中山大学孙逸仙纪念医院外科，广东 广州510120) [摘 要] 目的：探讨 RNA干扰沉默NANOG表达后对肝癌细胞HepG2中细胞周期素 D1(cyclinD1)表达及 细胞增殖的影响。方法 ：将 以NANOG基因为靶点的NANOG．siRNA瞬时转染肝癌细胞 HepG2，rea1．timePCR和 Westernbohting检测 NANOG、cyclinD1mRNA和蛋白的表达，CCK-8和平板克隆形成实验检测细胞增殖能力，流式 细胞术检测细胞周期情况。结果：与mock组 比较 ，转染NANOG-siRNA后 ，肝癌细胞 HepG2中NANOG、cyclinD1 mRNA和蛋白水平均下调(P0．05)，细胞增殖能力下降(P0．05)，进入 Go／G 期的细胞比例增多(P0．05)。 结论 ：沉默NANOG表达可引起肝癌细胞HepG2中cyclinD1的表达下降，导致细胞增殖能力下降。 [关键词] 肝肿瘤；NANOG蛋白；细胞增殖；细胞周期蛋 白Dl [中图分类号] R735．7 [文献标志码] A doi：10．3969／j．issn．1000-4718．2014．02．009 EffectofNANOG silencingon cyclinD1expressionandproliferation in humanhepatomaHepG2cells ZHOUJia-jia，CHENRu—fu，DENGXiao-geng，ZHOUYu，ZHOUQuan—bo，ZHANGJie， WUYao-hao，ZENGLe-xiang，QIURong—lin (DepartmentofSurgery，SunYat—senMemorialHospital，SunYat—senUniversity，Guangzhou510120，China．E—mail： chenrf63@163．com) [ABSTRACT] AIM：ToinvestigatetheeffectofNANOGsilencingoncyclinD1expressionandproliferationinhu— manhepatomaHepG2 cells．M ETHODS：TransienttransfectionofNANOG targetingsiRNA intoHepG2cellswasper- formed．TheexpressionofNANOG andcyelinD1atmRNA andproteinlevelswasdetectedbyreal-timePCRandWestern blotting．CellproliferationwasexaminedbyCCK-8assayandcolonyformationassay，andcellcyclewastestedbyflow cy- tometry．RESULTS：AftertransfcetionwithNANOG-targetingsiRNA ，theinhibitionofNANOG expressionWas observed． Comparedwithmockgroup。themRNAandproteinexpressionlevelsofNANOGandcyclinD1weredecreased(P 0．05)．Inaddition，knockdownofNANOGexpressioninhibitedthecellproliferationandincreasedtheproportionofGo／ G1-phaseceils(P0．05)．CONCLUSION：SilencingofNANOGexpressioninH