发根农杆菌对烟的转化及发根培育和烟碱合成条件的优化.pdfVIP

摘 要 本试验研究了发报农杆菌Ri质粒转化烟草的各种影响因素，确定了最佳的转化条件，建立 了烟草发根培养系统；对发根与非转化根的形态结构、生艮动态进行了研究，并在悬浮条件下， 进行了不同理化因子对烟草发根生长和烟碱合成调控的研究。主要结果如下： 体质粒，编码NPT II基因和GUS基因)转化烟草沙姆逊，获得了具有卡那霉索抗性烟草发 状根，该发状根具有典型的发状根特性(多根毛、多分支、在无激素培养基上快速生长)， 通过根尖压片分析，烟草发状根不具备典型的根冠；发状根向培养液中释放烟碱，释放量 最多时占总烟碱量的95．3％；在无激素的培养基上获得了再生植株。 2．对烟草发状根诱导的影响因子(诸如发根农杆菌菌株、烟草品种、叶片程度、菌液浓 度、稀释倍数、浸染时间、共培养时间等)进行了研究，确定出最佳的组合条件。 3．悬浮培养中发根的生长和物质合成受多种理化因子的影响(培养基、pH值、装液量、 蔗糖浓度、添加物等)的影响，本实验中，以1／2Ms液体为培养基，蔗糖20-30ell，pH值 6．0，装液量为容器体积的2／5，可添加水解酪蛋白(29／L)和吲哚乙酸(DA)(1 rap2-)， 在”℃，110 rpm下赔培养，25天左右收获，可达最佳效果。 4．烟草发状根培养中，激素对发状根生长和烟碱合成有较大影响。赤霉素(GA3)可显著 增加发状根的生长量，但抑制烟碱的生成；IAA在合适浓度(1 meJL)既能增加发状根的生 长又能促进烟碱的合成；萘乙酸(NAA)对发状根生长量和烟碱的生成无明显促进作用。 关键词：烟草，烟碱，发根农杆菌，发根，Ri质粒 Abstract Ri were thetransformationoftobacco Factors by plasmidofAgrobacteriumrhizogene affecting wasdefined．Thestructureofthe root studiedandthe transformationconditions hairy tip optimum and characteristicsof ofaselectedrootlinewel|Igstudied．Theand the growth physical dynamic hairy the nicotine of rootwere chemicalfactorsthataffect and biosynthesishairy investigated．The growth wereasfoflows： mainresults rootswereinducedfromtobaccoleaveswith LBAl334 rh面ogenes 1．Hairy Agrobacterium a PRil855and vectorPIG121HMa resistant harboring