HPLC法测定清咽宁喷雾剂中咖啡酸的含量论文.docVIP

　　HPLC法测定清咽宁喷雾剂中咖啡酸的含量论文 【摘要】 目的 建立测定清咽宁喷雾剂中咖啡酸含量的方法。方法 采用高效液相色谱法，用依利特BDS C18色谱柱（200 mm×5.0 mm，5 μm），以甲醇0.013 mol/L磷酸盐缓冲液（体积比23∶77）为流动相；流速为1.0 mL/min，检测波长为320 nm。结果 在0.042 5～ 0.425 μg范围内，峰面积与进样量线性关系良好（r＝0.999 9），加样平均回收率为99.05%，RSD为2.9%。结论 该法简便、可靠、准确.freelination of caffeic acid in Qingyanning spray by HPLC Abstract:Objective To establish an HPLC method for determination of caffeic acid in Qingyanning spray. Methods The sample n (200 mm×5.0 mm,.freel) using methanol0.013 mol/L phosphate salt solution (23∶77) as the mobile phase. The floL/min and the detection .Results The method exhibited good linearity from 0.042 5 to 0.425 μg (r=0.999 9). The average recovery ethod is convenient, reliable and accurate for the quality control of the spray. Key m×200 mm，5 μm）；流动相：甲醇磷酸盐缓冲液（取磷酸二氢钠1.56 g，加水使溶解成1 000 mL，再加1%磷酸溶液调节pH值至3.8～4.0）（体积比23∶77），流速：1.0 mL/min；理论板数以咖啡酸峰计算，不得低于3 000。 2.2溶液的制备 2.2.1对照品溶液的制备 精密称取在110 ℃干燥至恒重的咖啡酸对照品适量，加甲醇制成每1 mL含咖啡酸30 μg的溶液，即得。 2.2.2供试品溶液的制备 精密量取本品2 mL，加醋酸乙酯振摇提取3次，每次10 mL，合并提取液，蒸干，残渣加甲醇适量，使溶解，移入50 mL量瓶中，加甲醇至刻度，滤过，取续滤液，即得。 2.3测定波长的确定 取对照品（0.030 mg/mL）溶液，在500～200 nm波长范围内进行扫描，结果在320 nm波长处有最大吸收，见图１，故确定检测波长为320 nm。 ２.４色谱条件的确定 在上述色谱条件下，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5 μL，注入液相色谱仪测定。结果咖啡酸在15 min内出峰，而且与前后的峰均有较好的分离，理论板数在3 000以上。见图2，图3。 图1紫外光谱图 略 按本品制剂中工艺方法制得去蒲公英和忍冬藤的空白制剂，与供试品溶液色谱和咖啡酸对照品溶液色谱比较，结果阴性样品中未见咖啡酸色谱峰，见图4。 图2－图4 略 2.５线性关系考察 精密称取在110 ℃干燥至恒重的咖啡酸对照品17.0 mg,置100 mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取上述对照品溶液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0和5.0 mL分别置10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。按上述色谱条件分别注入液相色谱仪5 μL，测定峰面积。以进样量（m）为横坐标，峰面积(A)为纵坐标，绘制标准曲线并进行回归分析，得回归方程Ａ=１０ ３６８m-６１ ３４８，r=0.9999。结果表明：咖啡酸在0.0425～0.425 μg范围内峰面积与进样量呈良好的线性关系。 2.６精密度试验 精密吸取上述线性关系考察中第3号对照品溶液，按上述液相色谱条件，进样测定５次，结果峰面积的ＲＳＤ值为1.2℅，表明方法精密度良好。 2.７重复性试验 取本品(批号040628)5份，按“2.2.2”项方法制备，进样测定，结果咖啡酸平均质量比为0.500 mg/g，其ＲＳＤ值为1.97%，表明方法重复性好。 2.８加样回收率试验 取本品(批号040628)6份，精密加入咖啡酸对照品溶液(0.3 mg/mL)，按“2.2.2”项方法制备，进样测定，结果见表１。 表1咖啡酸回收率试验结果(略) 2.９稳定性试验 取本品（批号040628）,按“2.2.2”项方法制备，分别于0、1、2、4、8、24 h进行测定峰面积，结果ＲＳＤ值为1.3％，表明本品供试品溶液在0～