奶山羊miRNA-451表达谱分析及靶基因初步鉴定.docVIP

奶山羊miRNA-451表达谱分析及靶基因初步鉴定 郭文娇 李转见 张博文 蓝贤勇 雷初朝 陈宏 西北农林科技大学动物科技学院陕西省农业分子生物学重点实验室 河南农业大学牧医工程学院 X 关注成功！ 加关注后您将方便地在 我的关注中得到本文献的被引频次变化的通知！ 新浪微博 腾讯微博 人人网 开心网 豆瓣网 网易微博 摘????要： 基于实验室应用高通量测序得到的奶山羊泌乳峰期和干奶期乳腺组织中小RNA结果的基础上, 利用实时荧光定量PCR、基因克隆、重组腺病毒以及细胞培养等技术并结合生物信息学的方法, 对miRNA-451的表达谱及其靶基因进行了预测与验证分析。miRNA-451在不同组织和不同泌乳时期乳腺组织中的表达量结果显示:miRNA-451在肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、脂肪、卵巢组织表达量都很低, 在4个泌乳时期 (泌乳前期、泌乳峰期、泌乳末期和干奶期) 的变化与泌乳曲线的变化有相似之处, 同时在泌乳4个时期有逐渐降低趋势。本研究构建了携带奶山羊miRNA-451前体序列404bp的重组腺病毒载体。双荧光素酶报告检测系统检测结果表明, CAST基因为miRNA-451的靶基因。 关键词： 奶山羊; miRNA-451; 表达谱分析; 靶基因; 作者简介：郭文娇 (1987-) , 女, 陕西省西安市人, 硕士研究生, 研究方向:动物遗传学。 作者简介：陈宏, 教授, 研究方向:生物技术与家畜育种。 基金：高等学校博士学科点专项科研基金 (博导类) mi RNA是一种22个核苷酸 (nt) 左右的单链小分子RNA。它的发现开启了人类认识非编码RNA的新篇章, mi RNA在生物的生长过程中参与了细胞的增殖、分化、生物发育及代谢等许多生物学过程, 同时也在疾病发生发展过程中扮演了重要的角色[1]。mi RNA在乳腺发育过程中具有重要作用。Liu等[2]首次利用mi RNA芯片扫描了人的全基因组mi RNAs, 结果在乳腺组织中发现有23种mi RNAs的表达量较高, 但和其他21个组织中发现的mi RNAs数量相比, 乳腺组织中发现mi RNAs的数目较少。Iorio等[3]研究表明, mi RNA-125b在乳腺发育的各个阶段都处于高表达状态。在乳腺癌组织中mi RNA-125b处于表达量较低, 这表明抑制mi RNA-125b的表达对乳腺上皮细胞的分化具有破坏作用。Silveri等[4]利用Northern blot的方法分析发现在小鼠的乳腺中有9种特异表达的mi RNAs。Wang等[5]应用mi RNA芯片已分析出在小鼠的怀孕和哺乳期mi RNA-138和mi RNA-431有下调的作用, 而mi RNA-133和mi RNA-133a-133b具有上调的作用。Gu等[6]研究发现mi RNA-21, mi RNA-23a, mi RNA-24和mi RNA-143在乳腺的生长和发育期这些mi R-NAs发挥着重要的功能。Tanaka等[7]研究表明, mi RNA-101a对乳腺上皮细胞的发育和分化具有调控作用。AvrilSassen等[8]研究发现, 在乳腺发育过程中mi RNA的表达可能共同来调节一些集群, 而在这些集群中与乳腺癌相关的mi RNAs表达量显著增高, 影响这些mi RNAs共同调节的机制和功能为我们提供了一条新的研究乳腺生物学的途径。Cui等[9]的研究表明, mi RNA-126-3p对乳腺上皮细胞的增殖有调控作用, 其通过与其靶基因--孕酮受体 (PGR) 的3′UTR结合从而发挥作用的。 目前关于mi RNA-451研究主要集中在癌症上。Scholl等研究发现, mi RNA-451在诊断中的表达水平与IM疗法有相关性[10];Cheng等研究发现, mi RNA-451靶向干扰素调节因子参与全身性红斑狼疮的发生[11]。巢海潮等分析发现, mi R-451在不同膀胱癌细胞中差异表达, 其表达异常可影响癌细胞生物学功能[12]。Pigati等研究表明, mi R-451在正常乳腺上皮细胞高表达[13]。mi RNA-451的超表达可以抑制细胞周期的进程、细胞的迁移、入侵和促进非小细胞肺癌细胞的凋亡。本研究以西农萨能奶山羊泌乳峰期和干奶期的乳腺组织为研究材料, 基于本实验室以前的高通量测序及分析结果[14], 鉴定与奶山羊乳腺泌乳生理密切相关的mi RNA-451及其靶基因, 为西农萨能奶山羊的定向选育提供新的理论依据。 1 材料与方法 1.1 组织样品的采集与总RNA的提取 健康的成年西农萨能奶山羊母羊 (3周岁) , 采自杨凌姚南新村屠宰场。采取Trizol法提取西农萨能奶山羊乳腺组织, 及心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、肌肉、脂肪、卵巢组织的总RNA。 1.2