常用局部抗真菌药物对口腔白念珠菌mic的体外对比分析-comparative analysis of mic of common topical antifungal agents against oral candida albicans in vitro.docxVIP

中文摘要常用局部抗真菌药物对门蕴翻念珠菌中文摘要常用局部抗真菌药物对门蕴翻念珠菌 MIC的体外对毙研究摘 要目的：本实验应用荚m随豇临床实验摩标准化委员会 (NCCLS)’推荐的酵母翁液体培养基稀释法抗真菌药物敏 感性试验(以下簿称微璺稀释法)，透过测定氟康唑、制霉 菌素、洗必泰和柱皮油四种局部常用抗真菌药物对潮腔白 念珠菌临床分离株的最小抑菌浓度(MIC)，对这些药物的 抗菌活性进行体外对比研究，为临床治疗口腔自念球菌瘸 提供充分的理论依据，从而指导临床合理用药。方法：1．菌株的获取 采取2001年6月至2002年6月河北医科大学第二医院盈靛内科fI诊藉痰、乡}辩病隧40馕霹疑念珠蔺感染惑者 的‘口腔拭子标本。标本经直接涂片镜捡、CHROMagar Candida培养基分离培养、单菌落纯培养及API．20C。AUX 酵母蓉鉴定投秘念珠蓠小培养鉴定麓，获得瘸琢菠纯培养 株，将其一lt 37株自念珠随作为受试旃株。沭实验采用㈠念 珠菌ATCC 22019为质控菌株，实验前测定出氟康唑、制 霉蘧素、洗努泰弱撞皮浊四j}孛抗龚菠药物对找橡蓥鲶狱{e 值做为实验质控标准。实验先后重复三次，每次均包括此 椿蔼，戳判定结果是否可靠。2。微量培养板蛇接静 在室温25℃时，新鲜配制RPMI 1640液体培养基，滤中文摘要过除菌后备用。将氟康唑、制霉菌素、洗必泰和桂皮油原中文摘要过除菌后备用。将氟康唑、制霉菌素、洗必泰和桂皮油原 药(均从厂家获得)配成浓度分别为1280吲ml、 1280Pg／ml、25601-tg／ml、10240Pg／ml的贮存液(一2012保存)，使用前均用RPMI 1640液体培养基稀释10倍后再做 10级倍比稀释，使它们的终浓度分别为128～0．25Pg／ml；128,-,0．25Pg／ml，256-．-0．51．tg／ml，1024--209／ml。将37株活 化菌株分别溶于0．9％氯化钠溶液配成浓度为(I-5)× 106／ml的菌悬液，然后将这些菌悬液用RPMI 1640液体培 养基稀释1000倍，使其浓度稀释至(1-5)×103／ml。所 使用96孔微量培养板(8行×12列)，8行分上下两区：(每 区含4行)，每区用于检测四种药物(每种药物占1行) 对1株菌的敏感性；每行12孔中设定第1孔和第12孔分 别为阴性对照和阳性对照，第2—1 1孔为试验孔。接种时 每行各试验孔中加入某株菌的菌悬液100肛1，同时按由高 到低的顺序加入某种药物10级质量浓度梯度的药液 100tal；阴性对照孔每孔加2001．tl RPMI 1640液体培养基； 阳性对照孔每孔加1001．q RPMI 1640液体培养基和100灿1 该菌悬液。接种完毕后置培养板于35℃有氧环境中，培 养46～50小时后进行结果判定。3．MIC值结果判定 只有当阴性对照孔无菌生长(培养基透亮、清晰)，阳性对照孔菌生长良好(培养基明显混浊)，且质控菌株 符合质控标准，方认为实验成功，可进行结果判定。MIC是真菌生长完全被抑制时(肉眼观察)所对应试 验孔的抗真菌药物最低浓度。观察各试验孔真菌生长情 况，并与对照孔按下列标准进行比较，记录各试验孔的结中文摘要果。0：肉眼观察清晰(100％被抑制生长)，1：略模糊(80％中文摘要果。0：肉眼观察清晰(100％被抑制生长)，1：略模糊(80％ 被抑制生长)，2：浊度显著减低(50％被抑制生长)，3： 浊度轻度减低(20％被抑制生长)，4：浊度未减低(O％ 被抑制生长)。实验中我们观察到：制霉菌素、洗必泰和桂皮油终点 均明显，取0作为MlC封定标准。氟康唑的终点不十分 明确，取l作为MIC判定标准。将所读取的MIC值输入 计算机，采用SPSSl0．0软件处理，进行秩和检验，比较四种药物之间的差异性。结果j1．在40份标本中，除2份标本镜检阴性外，其余38 份标本镜检均为阳性，且在CHROMagar Candida培养基上 均生长出带色菌落。其中在36块培养基上仅有绿色菌落生 长，1块培养基上仅有紫色菌落生长，另1块培养基上有绿色和紫色菌落同时生长。分别从长有绿色菌落的37块培 养基上取单个绿色菌落，从长有紫色菌落的2块培养基上 取单个紫色菌落，纯培养后，经API．20C-AUX酵母菌鉴 定板鉴定，呈绿色菌落的37株菌均为白念珠菌，呈紫色菌 落的2株菌均为光滑念珠菌。经念珠菌小培养，呈绿色菌 落的37株菌血清芽管试验和厚壁孢子试验均为阳性，高倍 镜下，前者可见棒棰状芽管形成，后者可见树枝样假菌丝和顶端厚壁孢子形成。呈紫色菌落的2株菌芽管试验和厚 壁孢子试验均为阴性。2．经反复测定，四种抗真菌药物对质控菌株的MIC 参考值为：氟康唑：O．25～109／ml，制霉菌素：1-2垤／ml， 洗必泰：2—499／ml，