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PLLA珍珠层粉复合支架修复兔骨缺损实验研究 　　【摘要】 目的：研制PLLA/珍珠层粉复合支架在修复骨缺损体内降解与生物相容性，为临床应用骨修复提供实验依据。方法：采用冷冻干燥法制备PLLA、PLLA/珍珠层粉支架，用SEM测定其形态表征，用压汞仪测定支架的孔结构。选择24只健康成年新西兰大白兔为实验对象，将选取的24只兔子随机分为四组：A组：PLLA支架材料组，B组：PLLA/珍珠层支架组，C组：微小颗粒骨组；D组：空白组。利用牙钻制成双侧桡骨中段1 cm骨缺损作为骨修复模型，将不同复合支架材料植入缺损处。与术后4、8、12周行影像学、组织学、骨密度检测，并行Lane-sandhu评分，评价复合支架材料的成骨性。结果：成功制备出PLLA/珍珠层粉复合支架，扫描电镜支架断层面呈现出阶梯多孔结构，可见珍珠层粉均匀的分布在孔壁和边缘上，其支架材料的孔隙率在88～93%，双能X射线骨密度仪结合术后X线片得出：术后4、8周B组X线评分和组织学评分略低于C组（P0.05）。结论：PLLA/珍珠层支架具有良好的成骨作用，该结果为PLLA/珍珠层支架的临床应用提供了基础。 　　【关键词】 PLLA； 珍珠层； 骨修复； 支架 　　中图分类号 R68 文献标识码 A 文章编号 1674-6805（2015）22-0001-04 　　随着高空坠落伤、交通事故、暴力导致的开放性骨折增多，造成骨不连骨缺损患者也增加。上世纪中期，不断探索开发可降解材料在医学中的应用，可降解材料有良好的组织相容性，且不需要二次手术取出内植物[1-4]。作为可降解的高分子，PLLA被广泛应用于制备复合支架[5-7]。珍珠层为生物矿物，有不错的力学性能，其成分为文石碳酸钙镶嵌在类丝素蛋白网络中形成珍珠板片，通过珍珠板片层层堆垛，形成珍珠层[8]。有机基质的质量占总质量的1%～5%，这种有机-无机的结构决定了珍珠层有很好的力学性能和硬度[9-10]。研究表明，珍珠层有良好的生物相容性，珍珠层植入体内未发现炎症反应[11-12]。本实验探讨PLLA/珍珠层粉复合支架的生物相容性，选择兔桡骨缺损作为骨修复模型，将PLLA/珍珠层粉复合支架植入缺损处，并与PLLA支架和微小颗粒骨对照，通过对缺损部位影像学、组织学、Micro-CT和抗弯强度的检测，评价复合支架的成骨性能。现报道如下。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　本实验从2014年5月1日开始，至2014年12月20日结束。PLLA（Mw=17.9×104 Da），购自山东医疗器械公司。1，4-二氧六环，购自北京现代东方精细化工有限公司。纯度为99%乙醇，购自北京化工厂。所有试剂均为分析纯。淡水珍珠购自，浙江省诸暨市。珍珠粉为有光珍珠和无光珍珠。 　　1.2 方法 　　1.2.1 多孔支架的制备 精密称取一定质量的PLLA溶于1，4-二氧六环中搅拌直至完全溶解，配成浓度为5%（w/v）的混合溶液。然后加入过400目筛的文石粉，形成20%（w/w）的混合溶液，搅拌15 min后，超声25 min使粉末分散均匀。将溶液倒入圆柱体模具，放入冰箱-20 ℃冷冻24 h。取出模具放在冷冻干燥机中-60 ℃冷冻干燥2 d，制成PLLA/珍珠粉支架。放在真空干燥箱中干燥3 d以除去残存的1，4-二氧六环。用60Co灭菌后密封保存，密封后储藏在干燥皿中备用。 　　1.2.2 多孔支架材料形态与孔隙率的测定 用SEM观察多孔支架材料的形貌，样品在真空下喷金1 min后在10 kV的加速电压下观察；用压汞仪测定支架的孔结构，在低压模式下采集扫描法收集数据，计算平均孔径与孔隙率； 　　1.3 多孔支架材料修复骨缺损的实验 　　选用健康相同新西兰大白兔24只，雌雄不限，体重2～3 kg，平均2.2 kg，采用随机法分配，其中18只为植入材料动物，每组6只，两侧桡骨分别植入不同材料，其余6只作为对照组，按不同时间点（4、8、12周）留取样本，在福尔马林中浸泡固定，之后进行影像学、组织学等检测。 　　1.3.1 骨缺损造模与骨修复 （1）手术方法。将实验兔用戊巴比妥钠（3%）1 ml/kg腹腔麻醉，在麻醉下俯卧位取双侧小腿内侧中下段2 cm切口，切开皮肤、逐层分离皮下组织，直至桡骨，使用牙钻截取长约1.5 cm桡骨骨缺损。使用生理盐水、双氧水、0.05%碘伏冲洗干净后，每组分别植入不同的材料，逐层缝合切口，包扎伤口，连续3 d每天2次肌注注射庆大霉素注射液1 ml，预防感染。术后动物分笼饲养。 　　1.3.2 术后观察指标 进行骨移植部位骨密度、X线片、力学抗弯性能、组织学检查。X线观察和组织学检查按Lane-sandhu标准[3]评分，其内容包括骨形成、骨连接、骨塑形情况等。 　　1.4 统计学处理 　　采