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对流免疫电泳实验试剂研究 　　摘要：目的：研究与改良对流免疫实验试剂。方法：将破伤风梭菌经疱肉培养基培养后，培养液经离心、滤菌器过滤制备成未脱毒的破伤风梭菌外毒素。再将外毒素进行脱毒（化学法）和动物毒力试验，以获得无毒力的破伤风梭菌外毒素（粗制类毒素）。最后，以脱毒的破伤风梭菌外毒素作为抗原与TAT（抗体）进行对流免疫电泳实验。结果：改良后的试剂，其实验结果优于其它三种试剂。结论：改良后的试剂具有容易制备、低费用和安全性好的特点。 　　Abstract： Objective： To research and improve CIEP experiment reagent. Methods： After the culture of tetanus clostridium in cooked meat culture medium， centrifugal sedimentation and bacteria filter， the tetanus clostridium exotoxin without detoxification is filtered. Then， the exotoxin detoxification （chemical method） and animal toxicity test are carried out to acquire avirulence exotoxin （rough out exotoxin）. Finally， the detoxification clostridium tetani toxin is taken as antigen and TAT （antibody） is used to carry out CIEP experiment. Results： The experiment results of the improvemented reagents are better than that of the other three kinds of reagents. Conclusion： The improvemented experiment reagents have the characteristics of easy preparation and low cost and good security. 　　关键词：对流免疫电泳；破伤风梭菌；改良对流免疫电泳试剂 　　Key words： CIEP；tetanus clostridium；improved CIEP experiment reagent 　　中图分类号：R392-3 文献标识码：A 文章编号：1006-4311（2016）17-0189-02 　　0 引言 　　医学是一门实践性很强的学科，教育部、卫生部《关于加强医学教育工作提高医学教育质量的若干意见》指出“高等学校要积极创新医学实践教学体系，加强医学生实践能力的培养”。作为地市州普通高校，如何在有限的实验经费制约的情况下，提高实验项目的实践性和可操作性，增加学生的动手能力，是每个教师必须认真思考的问题。 　　而对流免疫电泳（counter immunoelectrphoresis，CIEP）是将琼脂内电泳与免疫扩散相结合的一种免疫学实验技术，具有抗原抗体反应高度特异性、微量快速和高分辨率等特点，是医学免疫学基础实验技术，也是抗原-抗体血清学检测的三大常规检测技术之一。作为医学生必做实验项目之一，该实验中常应用如下实验试剂[1]（见表1）。 　　表1显示对流免疫实验存在着：①试剂来源稀缺如AFP；②试剂价格昂贵如羊抗人IgG抗体；③试剂来源存在生物风险如HBsAg阳性患者血清。从实验管理角度分析，对流免疫电泳实验的常用试剂既不经济也不安全，严重制约学生实践动手操作能力等方面的培养。因此，笔者探索以破伤风梭菌为试剂替代物，对该实验试剂进行研究与改良。 　　1 材料与方法 　　1.1 实验材料 　　破伤风梭菌菌种（华中科技大学同济医学院医学微生物学教研室提供），疱肉培养基（液体培养基、碎牛肉、石蜡），豚鼠（300±30g）、昆明种小白鼠（20±2g）、破伤风抗毒素（tetanus antitoxin-in，TAT武汉生物制品研究所）等。 　　1.2 破伤风梭菌培养滤液外毒素的制备 　　将破伤风梭菌菌种接种于5～6支疱肉培养基中（6ml/支），37℃培养4天左右使破伤风梭菌释放出外毒素，并游离于培养基液体中。用毛细吸管吸取经培养后的疱肉培养基内上清培养液并移至数支离心管内，以1500～2000转/分，离心10分钟除去沉渣。再吸取离心管内液体移至玻璃滤菌器内，用真空泵抽过滤至整个培养液过滤完成，以除去培养液中