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枯草芽孢杆菌H4培养条件优化 　　摘要:以枯草芽孢杆菌H4为试验材料,利用Plackett-Burman设计法,对影响菌体生长的7个因素进行了筛选,确定影响该菌生长的主要因素为牛肉膏、转速、蛋白胨和NaCl;采用响应面分析法对其中3个重要因子的最佳水平进行研究。结果表明,当牛肉膏为8.635 g/L,蛋白胨为13.737 g/L,NaCl为5.345 g/L,接种量6.25%,初始pH7,温度39 ℃,转速150 r/min培养时,菌体密度显著提高,菌株H4的OD460值由0.899提高到了1.129。 　　关键词:枯草芽孢杆菌;Plackett-Burman设计;响应面分析法;优化 　　中图分类号:Q939.124文献标识码:B DOI编码:10.3969/j.issn.1006-6500.2009.04.007 　　 　　Optimization of Growth Conditions of Bacillus Subtilis H4 　　LI Ya-ling,ZHAO Yu-jie,XIE Feng-xing,ZHOU Ke,ZHANG Feng-feng 　　(Tianjin Research Center of Agriculture Biotechnology,Tianjin 300192,China) 　　Abstract:A strain of Bacillus subtilis H4 was isolated from the mud of pound, and the Plackett-Burman design was used to study the 7 factors influencing the growth of Bacillus subtilis H4. The results showed that beef extract, rotational speed, peptone and NaCl were the main factors. Response surface methodology was also used to research the optimization for the 3 main factors, and the results indicated that the concentration of Bacillus subtilis H4 was significantly increased and the OD460 of the broth increased from 0.899 to 1.129 under the condition of beef extract 8.635 g/L, peptone 13.737 g/L, NaCl 5.345 g/L, inoculation 6.25%, initial pH7, temperature 39 ℃ and rotational speed 150 r/min. 　　Key words: Bacillus subtilis;Plackett-Burman design;response surface method;optimization 　　 　　随着水产养殖业的迅猛发展和集约化经营程度的不断提高,养殖水体污染日趋严重,许多养殖池中有害藻类及病菌大量繁殖,水质条件不断恶化,其后果影响到了水产品安全和产业的可持续发展[1]。利用常规药物防治方法,不但易加重水质恶化程度,成本也较高,而利用微生物制剂改善养殖水体环境受到人们越来越多的关注[2,3]。枯草芽孢杆菌是一种好氧的革兰氏阳性菌[4],在自然界广泛存在,生命力极强,代谢旺盛,对人畜无害,不污染环境,具有广谱的抗菌活性和极强的抗逆能力[5-7]。枯草芽孢杆菌能有效的降解水体中的氨氮、亚硝酸盐和硫化物[8-10],达到净化水质的目的。因此,枯草芽孢杆菌在养殖水体的生物修复方面得到了广泛的应用。 　　用枯草芽孢杆菌H4发酵后经离心的菌体处理模拟养殖水,结果表明,H4能有效降解水体中的亚硝酸盐、氨氮,使水体中溶解氧含量逐渐升高。因此,菌体浓度是影响水体净化效果的主要因子之一。鉴于培养条件对菌体生长的影响,有必要对其进行优化,以获得较高的含菌量。本试验采用Plackett-Burman设计和响应面分析法对枯草芽孢杆菌发酵生产的相关影响因素进行了研究,以期从众多影响因素中快速有效地筛选出主要的影响因子,通过回归各因素水平及其相互作用与响应值之间关系的二次多项式,对各因子进行优化,确定较优的发酵条件,为后续的扩大培养和微生态制剂的开发应用提供理论依据。 　　 　　1材料和方法 　　 　　1.1材 料 　　菌株:枯草